摘要：在過去的四年半中，多種實(shí)驗(yàn)性的生物治療方法獲得了商業(yè)注冊(cè)。但是生物仿制藥的出現(xiàn)，才是生物制品批準(zhǔn)領(lǐng)域中的zui大轉(zhuǎn)變。

在過去的四年半，新的生物藥的批準(zhǔn)率下降了。從2006年起，只有25個(gè)全新的生物藥實(shí)體（NBE）在美國或歐洲批準(zhǔn)上市；期間總共批準(zhǔn)了58份申請(qǐng)（包括生物仿制藥和“me too”化合物）?，F(xiàn)在商場上的生物藥數(shù)目已經(jīng)超過200個(gè)了。

我們之前的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，zui大的變化來自于生物仿制藥的崛起。在歐洲共批準(zhǔn)了14個(gè)這樣的產(chǎn)品，生物仿制藥監(jiān)管法規(guī)正在其它國家逐步確立，包括在美國。

在過去四年商業(yè)注冊(cè)的實(shí)驗(yàn)性的生物治療中，包括了*個(gè)癌癥疫苗（預(yù)防和治療性），*個(gè)雙特異性單克隆抗體。我們甚至還在期待*個(gè)基因治療產(chǎn)品的批準(zhǔn)；基于小干擾RNA（siRNAs）、人類胚胎干細(xì)胞（hESC）和可誘導(dǎo)干細(xì)胞（iPS）的產(chǎn)品仍然很有前景。

用于生產(chǎn)生物制品的體系種類也有了很大的進(jìn)步：*個(gè)由昆蟲細(xì)胞和酵母（Pichia pastoris） 細(xì)胞生產(chǎn)的產(chǎn)品；基于酵母和植物細(xì)胞的生產(chǎn)系統(tǒng)已用于生產(chǎn)基因工程改造過的糖基化的產(chǎn)品。生產(chǎn)上游和下游處理的流線性化改進(jìn)也十分顯著，特別值得一提的是可拋棄型系統(tǒng)的廣泛使用。

在接下來的部分，我將提供zui近4年半（從2006年1月到2010年6月）新批準(zhǔn)上市的生物藥名單，類型及其針對(duì)的適應(yīng)癥。與之前的那篇文章一樣，并沒有包括組織工程產(chǎn)品，因?yàn)镕DA將它劃分為純醫(yī)藥器械類型。

新上市產(chǎn)品

在這四年半中，歐洲和美國批準(zhǔn)上市的58個(gè)生物藥中包括：30個(gè)激素、生長因子、調(diào)節(jié)分子，13個(gè)單抗類產(chǎn)品，4個(gè)血液相關(guān)蛋白，2個(gè)亞單位疫苗，9個(gè)其它類產(chǎn)品（包括融合蛋白和治療用酶）。平均一年批準(zhǔn)約13個(gè)產(chǎn)品上市表明該領(lǐng)域是充滿生機(jī)的。進(jìn)一步分析，這其中40%（25個(gè)）是全新生物藥分子（NBE）；近50%（28個(gè)）是先前批準(zhǔn)的生物藥的仿制藥、me too化合物。此外，5個(gè)產(chǎn)品是新批準(zhǔn)了適應(yīng)癥（2006年之前已批準(zhǔn)了其它適應(yīng)癥）。

4年半中批準(zhǔn)了25個(gè)全新生物藥與先前文章相比并不容樂觀（03-06三年間批準(zhǔn)了27個(gè)；03年前半年批準(zhǔn)了30個(gè)）。2008年特別令人失望，只有四個(gè)全新的生物藥獲得美國批準(zhǔn)：Arcalyst，Cimzia，Nplate，Recothrom；除去這四個(gè)，歐洲實(shí)際上甚至沒有全新生物藥上市。

雖然這樣短期內(nèi)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)難以描繪出未來發(fā)展的大方向，但是可以看出批準(zhǔn)上市的新生物藥實(shí)體總數(shù)呈下降趨勢，這是令人沮喪的。此外，這些新批準(zhǔn)的生物藥難以成為重磅炸彈級(jí)產(chǎn)品，因?yàn)樵S多產(chǎn)品是作為孤兒藥開發(fā)的。只有四個(gè)產(chǎn)品：Arzerra，Removab，Provenge，Vectibix的適應(yīng)癥是癌癥；另外有兩個(gè)宮頸癌疫苗Cervarix和Gardasil是預(yù)防癌癥的。生物仿制藥和reformulated（類似藥物）將大量涌入一個(gè)早已充滿競爭的市場。例如，這期間共有八個(gè)EPOs的生物仿制藥獲得上市許可；而之前已經(jīng)有五個(gè)EPOs產(chǎn)品。競爭將會(huì)相當(dāng)激烈，即便EPO的*約有100億美元/年。與此類似，filgrastim（非格司亭）有6個(gè)仿制藥上市，適應(yīng)癥是嗜中性白細(xì)胞減少癥，將與市場上已有的三個(gè)filgrastim類產(chǎn)品展開競爭。

即便存在競爭，生物制藥行業(yè)整體上仍然呈現(xiàn)顯著的增長。2007年，生物藥的總銷售額為940億美元，現(xiàn)已發(fā)展成為一個(gè)6000億美元的制藥產(chǎn)業(yè)。重組治療性蛋白（不包括抗體）2009年總計(jì)銷售額為610億美元，單克隆抗體2009年銷量增長380億美元，達(dá)到990億美元。

在zui為的重磅炸彈級(jí)產(chǎn)品中，治療癌癥的單抗占據(jù)了主要位置：Rutuxan，Herceptin，Avastin，Erbitux，Vectibix，此外還有靶點(diǎn)為TNF的Enbrel，Remicade，Humira和Cimzia。這兩組產(chǎn)品2009年的銷售額都達(dá)到了180億美元。緊隨其后的是，胰島素及其類似物，總銷量約133億美元。*三的是EPOs類產(chǎn)品，2009年總銷量為95億美元。2009年生物藥銷量排行榜上，*種有5個(gè)，甚至前五中有4個(gè)都是單抗類產(chǎn)品，印證了該類產(chǎn)品在生物藥行業(yè)的杰出表現(xiàn)。（單品種藥物銷量*0排行中，單抗都能占4個(gè)（不算Enbrel）。）

分開來看，四年半中歐盟批準(zhǔn)了49個(gè)生物藥。包括14個(gè)生物仿制藥，8個(gè)reformulated或me too產(chǎn)品，還有5個(gè)先前被美國批準(zhǔn)的產(chǎn)品；所以實(shí)際上只有22個(gè)新生物實(shí)體。雖然歐盟監(jiān)管系統(tǒng)對(duì)全新藥物的上市要求作出了明確規(guī)定，四年半間仍有120個(gè)這樣的產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市，所以新生物實(shí)體只占總數(shù)的18%（與03-06年的數(shù)據(jù)22%相比，下降了）。

四年半間，美國批準(zhǔn)了21個(gè)新生物實(shí)體的上市要求。同期共有99個(gè)全新藥物上市，新生物實(shí)體所占比例為21%（與03-06年的數(shù)據(jù)24%相比，也下降了）。

同期美國批準(zhǔn)了11個(gè)reformulated或me too生物藥上市，使得市場中類似藥物達(dá)到了32個(gè)。僅看生物藥批準(zhǔn)數(shù)量，歐盟（49個(gè)）比美國（32個(gè)）多，主要是因?yàn)闅W盟批準(zhǔn)的生物仿制藥更多。

除Recothromb外，這篇文章回顧時(shí)間內(nèi)所有新批準(zhǔn)的生物實(shí)體都是注射使用的。Recothromb（重組人*）的適應(yīng)癥為輕微手術(shù)中出血并直接應(yīng)用在出血部位。輝瑞公司2006年獲批的吸入式胰島素產(chǎn)品Exubera可以說是吸入式生物藥的分水嶺，在Exubera撤市以后，Novo Nordisk和Lilly也中斷了研發(fā)吸入式胰島素產(chǎn)品。僅有MannKind公司仍然堅(jiān)持開發(fā)吸入式胰島素產(chǎn)品Afrezza，F(xiàn)DA也開始對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行上市審批。

新批準(zhǔn)的抗體

25個(gè)批準(zhǔn)上市的新生物實(shí)體中有13個(gè)是抗體。2009年是值得紀(jì)念的一年，因?yàn)楣灿?個(gè)單抗產(chǎn)品通過審批在歐盟或美國上市。其中四個(gè)：Arzerra，Ilaris，Simponi和Sara是全人抗體。之前僅有2個(gè)全人抗體獲批，分別是Vectibix（2006年）和Humira（2000年）。另外值得注意的是Removab，它是上市的*個(gè)雙特異性抗體，由歐盟于2009年批準(zhǔn)上市。

雖然在這四年半間，13個(gè)單抗批準(zhǔn)上市是令人高興的一件事。但是這些產(chǎn)品要么是面對(duì)不大的市場需求，要么就是面對(duì)已有產(chǎn)品的激烈競爭。例如，Ilaris和Soliris都是孤兒藥，而Cimzia和Simponi要面對(duì)先前上市的3個(gè)TNF-α抑制劑（Humira, Enbrel和Remicade）的競爭。TNF-α抑制劑主要是用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和Crohn diease（炎癥性腸病），這是一個(gè)利潤豐厚的市場。現(xiàn)今的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎市場約為110億美元，今年年底炎癥性腸病的生物藥治療市場也將達(dá)到50億美元。

腫瘤疫苗

批準(zhǔn)的兩個(gè)腫瘤疫苗也是里程碑事件。兩個(gè)宮頸癌疫苗Gardasil和Cervarix針對(duì)的是人乳頭瘤病毒HPV。HPV是宮頸癌的主要致病原因，宮頸癌是僅次于乳腺癌的女性第二大殺手。HPV通過性接觸廣泛傳播，50%的年輕女性在被傳播五年內(nèi)變?yōu)閟exually active。兩種HPV亞型HPV 16和HPV 18被認(rèn)為是高度致癌的，導(dǎo)致了約70%的宮頸癌。平均每年新診斷出50萬例宮頸癌，每年導(dǎo)致約30萬人死亡。Cervarix是二價(jià)疫苗，含有重組的人乳頭狀瘤病毒亞型16和18衣殼蛋白L1，Gardasil是一種四價(jià)疫苗，含有HPV亞型6，11，16和18重組的衣殼蛋白。除了預(yù)防宮頸癌，Gardasil還能提供對(duì)生殖器疣的預(yù)防，因?yàn)?0%的生殖器疣都是由HPV亞型6，11造成的。行業(yè)分析師預(yù)測這些疫苗的年銷量可能超過10億美元，即便這兩種疫苗在推廣過程中可能遭遇道德、宗教問題。

*個(gè)治療性細(xì)胞疫苗Dendreon公司生產(chǎn)的Provenge，適應(yīng)癥是轉(zhuǎn)移性前列腺癌，在經(jīng)過艱辛的審批道路過后，于2010年獲得批準(zhǔn)在美國上市。Provenge用標(biāo)記物CD52濃縮來自病人的細(xì)胞，用重組前列腺酸性磷酸酶-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（PAP-GM-CSF）融合產(chǎn)物，體外激活來自病人的細(xì)胞，然后重新注入病人體內(nèi)。因?yàn)檫@種自體細(xì)胞療法面臨生產(chǎn)擴(kuò)大的難題，公司只計(jì)劃在*年里生產(chǎn)2000劑量的產(chǎn)品，只能為一小部分前列腺癌患者服務(wù)。

生物仿制藥

早在2000年，歐盟就生物仿制藥的批準(zhǔn)上市制定了相關(guān)的法律。歐盟藥物機(jī)構(gòu)（EMA）發(fā)展了配套的主要法規(guī)和產(chǎn)品特異性的指導(dǎo)方針。歐盟要求生物仿制藥必須提供和原研藥的比較研究數(shù)據(jù)。生物仿制藥的申請(qǐng)檔案（相對(duì)于原研藥）必須含有全程質(zhì)量監(jiān)督模塊（比如說生產(chǎn)、檢驗(yàn)的細(xì)節(jié)信息）和簡略的臨床、非臨床數(shù)據(jù)模塊。歐盟法規(guī)的全面性已經(jīng)經(jīng)過了14個(gè)生物仿制藥的驗(yàn)證，包括2個(gè)人重組生長因子（hGH），7個(gè)白細(xì)胞集落刺激因子（G-CSFs; filgrastims），5個(gè)EPO生物仿制藥。證明了開發(fā)含大量糖基化復(fù)合物的生物仿制藥的可行性。EPO有1個(gè)O-和3個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，并且糖基可占到EPO分子量的40%。盡管具有如此的復(fù)雜性，EPO的生物仿制藥展現(xiàn)出了與原研藥相近的糖基化模式，并達(dá)到了歐盟生物仿制藥的監(jiān)管法規(guī)。但在本文回顧的2006-2010年間，歐盟拒絕、撤銷了5個(gè)生物仿制藥上市申請(qǐng)。

如今，歐盟的人類藥物產(chǎn)品委員會(huì)的生物仿制藥監(jiān)管者正在更新EPO仿制藥的指導(dǎo)方針，以及完善卵泡刺激激素（FSH）、干擾素-β、單抗的指導(dǎo)方針。單克隆抗體的分子量、結(jié)構(gòu)、功能的復(fù)雜性使得發(fā)展單克隆抗體藥物的生物仿制藥充滿挑戰(zhàn)。然而*代單抗產(chǎn)品即將面臨到期，包括：Herceptin, Rituxan, Remicade 和Humira，巨大的市場價(jià)值使得它們成為生物仿制藥的目標(biāo)。盡管歐盟關(guān)于單抗的指導(dǎo)方針不會(huì)在近幾個(gè)月完成，人類藥物產(chǎn)品委員會(huì)已經(jīng)在為開發(fā)單抗的生物仿制藥提供系統(tǒng)的通告。

生物仿制藥在美國的發(fā)展更為艱辛，但是在奧巴馬總統(tǒng)簽署生效的醫(yī)改法案中，已經(jīng)批準(zhǔn)了其審批的大致架構(gòu)。在未來幾年，批準(zhǔn)生物仿制藥上市的步伐將大為加快。制藥企業(yè)諸如Merck, Cangene, Sandoz, Teva, Dr Reddy’s 和Biocon公司已經(jīng)準(zhǔn)備著搶占生物仿制藥這塊市場。其他地區(qū)，如加拿大也在發(fā)展生物仿制藥監(jiān)管法規(guī)，澳大利亞則直接采用歐盟的法規(guī)，日本、瑞士、土耳其和幾個(gè)其他地區(qū)也采取相似的法規(guī)。

現(xiàn)在仍然不知道，生產(chǎn)生物仿制藥的與先前的爭論、開發(fā)投入是否對(duì)等。生物仿制藥可能比原研藥節(jié)約10-30%的費(fèi)用，但也有人預(yù)測原研產(chǎn)品仍將*的大部分份額。2008年，歐盟的生物仿制藥市場約6000萬美元，估計(jì)到2013年，美國的生物仿制藥市場將達(dá)到3000萬美元。此外，生物仿制藥在其他地區(qū)的市場也將占據(jù)相當(dāng)?shù)姆蓊~。生物仿制藥的銷售額在2007年已經(jīng)超過了13億美元（10億歐元）。到2016年，價(jià)值約332億美元（250億歐元）的生物制品將失去保護(hù)。到時(shí)候在歐盟和美國，單克隆抗體和其他重磅炸彈級(jí)產(chǎn)品的仿制藥出現(xiàn)會(huì)將生物仿制藥*。一些分析人士預(yù)測多個(gè)生物仿制藥將會(huì)成為重磅炸彈級(jí)產(chǎn)品，到2017年將達(dá)到13億美元（10億歐元）的銷售額。

生物藥生產(chǎn)系統(tǒng)

通過分析2006-2010批準(zhǔn)的生物藥，可以發(fā)現(xiàn)大部分生物藥仍然是通過哺乳動(dòng)物細(xì)胞和大腸桿菌生產(chǎn)的，這兩者仍然是生物制藥領(lǐng)域生產(chǎn)系統(tǒng)的主力。在批準(zhǔn)的58個(gè)產(chǎn)品中，32個(gè)是在哺乳細(xì)胞（主要是CHO）中生產(chǎn)的，17個(gè)是在大腸桿菌中生產(chǎn)的，4個(gè)是釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中生產(chǎn)的：liraglutide，Gardasil，Valtropin，active ingredient in Novolog mix insulins。Atryn（抗*）仍然是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)生物藥的*代表；Macugen（哌加他尼）則是通過直接合成的生物藥的*代表。該領(lǐng)域的進(jìn)步包括：在baculovirus-insect cell 系統(tǒng)中生產(chǎn)的Cervarix和Provenge’s fusion protein獲準(zhǔn)上市；在巴斯德酵母（P. pastoris）中生產(chǎn)的Kalbitor獲準(zhǔn)上市。

另外至少有2個(gè)用植物生產(chǎn)的重組蛋白（CaroRx和人造血內(nèi)因子）獲得歐盟批準(zhǔn)用于醫(yī)療保?。ǚ菄?yán)格意義的藥物）。CaroRx是一個(gè)單抗，特異性的結(jié)合于變形鏈球菌（Streptococcus mutans），而變形鏈球菌是細(xì)菌性蛀牙的主要起因。將產(chǎn)品用于牙齒表面，能阻止細(xì)菌黏附，減少齲齒的發(fā)生率。人造血內(nèi)因子被批準(zhǔn)作為膳食添加劑，用于治療*12缺乏。

另一個(gè)里程碑是基于植物生產(chǎn)的注射性藥物很可能獲得批準(zhǔn)。Protalix Biotherapeutics公司的Taligurase alfa（用培養(yǎng)的胡蘿卜細(xì)胞生產(chǎn)的重組葡糖腦苷酯酶）正在進(jìn)行臨床3期實(shí)驗(yàn)，是該領(lǐng)域很有力的競爭者。葡糖腦苷酯酶替代治療通常用于治療高雪氏癥（Gaucher disease），這是一種罕見的溶酶體存儲(chǔ)失調(diào)疾病?，F(xiàn)有的產(chǎn)品是從胎盤提取或用CHO細(xì)胞重組表達(dá)的。通過這兩種方式得到的產(chǎn)品在下游提純中需要經(jīng)過外切葡萄糖苷酶處理，以除去產(chǎn)品糖基化組分中的唾液酸末端。這樣做能暴露出甘露糖末端，能促進(jìn)macrophages（靶細(xì)胞）通過細(xì)胞膜上的甘露糖受體直接吸收藥物。通過植物細(xì)胞生產(chǎn)的Taligurase alfa，通過植物*的C末端信號(hào)肽，在生物合成之后儲(chǔ)存于植物液泡。通過植物表達(dá)的產(chǎn)物的糖基化組分自然帶有甘露糖末端，與通過外切葡萄糖苷酶處理的一樣。因此在下游處理中能減少外切葡萄糖苷酶處理的步驟。

蛋白質(zhì)工程

2006-2009年批準(zhǔn)的25個(gè)新生物實(shí)體中，有17個(gè)通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)行過修飾。在批準(zhǔn)的11個(gè)抗體中，有6個(gè)是全人抗體，1個(gè)是雙特異性抗體，剩下的都是人源化抗體。兩個(gè)單抗片斷（Cimzia和Scintimun）也獲得了批準(zhǔn)，Scintimun用于診斷，是由一個(gè)鼠抗衍生而來。而Cimzia則是人源化、PEG修飾的；這個(gè)anti–TNF-α Fab 片斷zui初于2008年批準(zhǔn)用于Crohn’s disease，09年5月又批準(zhǔn)它用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。單個(gè)PEG是分枝狀結(jié)構(gòu)40 kDa的分子，通過上僅有的一個(gè)半胱甘酸殘基（Cys227）連接到抗體片斷的C末端。PEG化大大延長了Cimzia的血漿半衰期，只用每月注射一次。

剩下的兩個(gè)產(chǎn)品（Arcalyst 和Nplate）是二聚體融合蛋白；諾和諾德的Victoza是一個(gè)胰高血糖素樣肽1 （GLP-1）類似物，并連上了一個(gè)脂肪酸分子。GLP-1是腸促胰島素激素家族的一員，腸促胰島素激素是一類可促進(jìn)胰島素生成和分泌的激素。Victoza與原分子有30個(gè)氨基酸的差別，原分子的一個(gè)賴氨酸殘基被*取代，并在剩余的賴氨酸殘基上連上了一個(gè)C16脂肪酸。這樣的變化使該激素類似物的血漿半衰期從2分鐘提高到13小時(shí)，使得2型糖尿病患者每天只用注射一次。該藥有成為重磅炸彈的潛力，因?yàn)榭固悄虿∷幬锸袌鲆呀?jīng)在2009年達(dá)到了230億美元。

糖基化工程

大部分治療性蛋白都有一個(gè)或多個(gè)翻譯后修飾，并且這些翻譯后修飾步驟肯定會(huì)影響生化性質(zhì)、治療效果。糖基化修飾是翻譯后修飾中zui常見的一種，40%已批準(zhǔn)上市的治療性蛋白都與其有關(guān)。用哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)糖基化修飾的生物藥，除一些已經(jīng)認(rèn)識(shí)到的局限外，就是受限于哺乳動(dòng)物細(xì)胞無法產(chǎn)生治療上可接受的糖基化模式。

一個(gè)值得注意的趨勢就是通過糖基化工程去改造一個(gè)生物藥的糖基化，以改進(jìn)一些治療屬性。早前的方法涉及下游處理（如先前提到的葡糖腦苷酯酶）或在蛋白骨架上提供一些額外的糖基化位點(diǎn)——例如Amgen的EPO的類似物Aranesp。在zui近的2-3年，后一項(xiàng)技術(shù)被應(yīng)用到其他生物藥（至少是實(shí)驗(yàn)層面上）。高度糖基化的干擾素-α變異體，其血漿半衰期提高了25-50倍。高度糖基化的FSH變異體注射到雌性小鼠體內(nèi)后，促進(jìn)了排卵和胚胎細(xì)胞形成。

另一種可選方案則是將預(yù)合成的低聚糖通過化學(xué)連接的方式連接到蛋白骨架上。例如，zui近報(bào)道了通過將帶有甘露糖-6-磷酸（MP-6）末端的低聚糖連接到（α-葡萄糖苷酶）蛋白骨架上促進(jìn)了肌肉細(xì)胞通過細(xì)胞膜表面的MP-6受體吸收溶酶體的α-葡萄糖苷酶（用于治療Ⅱ型糖原貯積癥）。進(jìn)一步的研究表明，這種修飾與Ⅱ型糖原貯積癥小鼠模型中的治療效果改善有關(guān)聯(lián)。

酵母和植物細(xì)胞中的糖基化工程也取得了進(jìn)展，這兩個(gè)系統(tǒng)相對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)具有技術(shù)、經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢，但這兩個(gè)系統(tǒng)都不適合于生產(chǎn)糖基化產(chǎn)品。糖基化蛋白在酵母中表達(dá)，總是導(dǎo)致連接上許多富含甘露糖的糖基側(cè)鏈，而缺乏降低藥物血漿半衰期的唾液酸末端。在植物細(xì)胞中表達(dá)糖蛋白則產(chǎn)生含有木糖和巖藻糖的超高糖基化產(chǎn)物，而木糖和巖藻糖基對(duì)人是具有免疫原性的。此外，糖基側(cè)鏈往往缺乏唾液酸末端，這是能負(fù)調(diào)控糖基化藥物血漿半衰期的。

酵母的糖基化工程也取得了進(jìn)展，使得酵母能夠生產(chǎn)滿足治療性生物藥品的糖基化。從經(jīng)濟(jì)角度來看，Merck全資下屬子公司Glycofi在該領(lǐng)域做出了巨大貢獻(xiàn)：經(jīng)它們糖基化工程改造的巴斯德酵母能夠生產(chǎn)均一性的帶唾液酸末端的糖基化產(chǎn)物。這需要敲除掉4個(gè)基因（避免酵母*的糖基化）并引入14個(gè)和糖基化有關(guān)的基因。

在植物系統(tǒng)中，zui近一個(gè)重大進(jìn)步是開發(fā)出了缺乏木糖和巖藻糖核心轉(zhuǎn)移酶的體系。Greenovation Biotech開發(fā)了一種糖基化工程敲除木糖和巖藻糖核心轉(zhuǎn)移酶的苔蘚（Physcomitrella patens）。這種苔蘚長在一個(gè)光合自養(yǎng)的密閉發(fā)酵體系中。培養(yǎng)基僅僅是由水，礦物質(zhì)組成的，光和二氧化碳作為能源和碳源。另外還有BiolexTherapeutics開發(fā)出了一種用RNAi干擾去除木糖和巖藻糖核心轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的浮萍系統(tǒng)。Biolex的核心產(chǎn)品Locteron（干擾素-α 2b）在今年四月已經(jīng)宣布進(jìn)入臨床2b期。

生物上游和下游處理

醫(yī)療改革，醫(yī)療預(yù)算的壓力和行業(yè)內(nèi)競爭迫使生物仿制藥生產(chǎn)企業(yè)降低生產(chǎn)成本。這些年可喜的見到了許多生產(chǎn)上游和下游的改進(jìn)，例如可拋棄式系統(tǒng)和下游處理流水線的發(fā)展。

一次性可拋棄式生物反應(yīng)器的出現(xiàn)是一個(gè)重要的事件。例如通用公司的波浪式反應(yīng)器和Xcellerex公司的XRD生物反應(yīng)器等等。通用公司的袋式波浪反應(yīng)器的容量可達(dá)500L，由多層塑料制成，zui里層是生物相容性很好的乙烯醋酸乙烯酯——聚乙烯的共聚物。袋式生物反應(yīng)器由γ-射線滅菌，并通過搖動(dòng)來使培養(yǎng)基混勻。Xcellerex公司的XRD生物反應(yīng)器，其袋容量可達(dá)2000L，細(xì)胞培養(yǎng)帶內(nèi)部安置有此例攪拌器來混勻培養(yǎng)基，在上游處理過程中可以封裝在不銹鋼外殼的內(nèi)部。

支持者認(rèn)為，一次性生物反應(yīng)器可減少核心設(shè)備的需求、可快速建立生產(chǎn)線、減少認(rèn)證步驟、減少原位清洗、并縮短生產(chǎn)周轉(zhuǎn)期。即便如此，一次性生物反應(yīng)器高昂的細(xì)胞袋價(jià)格，并須每次更換，并且由此產(chǎn)生的有害物質(zhì)處理費(fèi)用是它的缺點(diǎn)。此外，許多生產(chǎn)工廠已經(jīng)在安裝和認(rèn)證傳統(tǒng)不銹鋼生產(chǎn)系統(tǒng)投入巨資，并且一般在大規(guī)模生產(chǎn)（大于2000L）時(shí)才會(huì)使用該系統(tǒng)；因而一次性系統(tǒng)在特定情況下仍然是具有很大吸引力的。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量也在提高，如今，5g/L的產(chǎn)量是很平常的。并且在將來的產(chǎn)量還會(huì)隨著篩選出高表達(dá)量的哺乳動(dòng)物細(xì)胞株，培養(yǎng)基優(yōu)化，延長培養(yǎng)基中的細(xì)胞壽命而進(jìn)一步提高。

隨著產(chǎn)量不斷提高，大規(guī)模生產(chǎn)的瓶頸將會(huì)轉(zhuǎn)移到下游處理過程中。值得注意的是，下游處理費(fèi)用占到了生產(chǎn)總成本的80%。例如，每個(gè)生產(chǎn)周期消耗的過濾細(xì)菌的濾器價(jià)格高達(dá)25000美元，一支生產(chǎn)中用的蛋白A親和層析柱的價(jià)格高達(dá)150萬美元。高昂的價(jià)格促進(jìn)了該領(lǐng)域的革新，主要重點(diǎn)則在于下游處理的流水線化和簡便化。例如，已經(jīng)開發(fā)出了帶電荷的厚濾器，在去除細(xì)胞碎片的同時(shí)選擇性的除去一些污染物：如DNA和宿主蛋白。一些不常用的純化方法，如雙向萃取、結(jié)晶、沉淀重新進(jìn)入了人們的視野。另一方面，開發(fā)一些非傳統(tǒng)的色譜材料、支持物，色譜移動(dòng)床吸附和其它非傳統(tǒng)模式也取得了進(jìn)展。

核酸類產(chǎn)品

從2006年起，沒有一個(gè)核酸產(chǎn)品在歐盟或美國獲批上市。*個(gè)人類基因治療試驗(yàn)始于1989年。在過去20年間，共有1443起核酸治療產(chǎn)品進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，主要是在美國。核酸治療的臨床試驗(yàn)主要是針對(duì)癌癥（占總數(shù)的64%），其次是針對(duì)心血管疾病，單基因突變類疾病，感染類疾病，三者各占臨床試驗(yàn)總數(shù)的8%。過去20年間，超過1000起臨床試驗(yàn)，而無一個(gè)人用產(chǎn)品在歐盟或美國獲批上市。

值得注意的是，獲批的幾個(gè)核酸類產(chǎn)品（DNA疫苗）都是做為獸藥應(yīng)用。輝瑞旗下Fort Dodge’s的產(chǎn)品West Nile Innovatorzui先于2005年由美國*批準(zhǔn)上市，用于給馬接種預(yù)防西尼羅河病毒。這是一個(gè)質(zhì)粒類疫苗，攜帶有西尼羅河病毒表面抗原的基因序列。在肌肉注射過后，經(jīng)由細(xì)胞吸收，質(zhì)粒表達(dá)抗原，并觸發(fā)免疫保護(hù)。其它獲批的DNA動(dòng)物疫苗包括：

Apex-IHN （DNA疫苗，表達(dá)傳染性造血組織壞死病毒的外殼糖蛋白，Novartis生產(chǎn)，2005年在加拿大獲批用于鮭魚） ；LifeTide-SW5 （針對(duì)生長激素釋放激素，VGX Animal Health生產(chǎn)，2007年在澳大利亞獲批用于預(yù)防豬胎流產(chǎn)）；犬黑色素瘤疫苗（表達(dá)人*酶的DNA疫苗，Merial生產(chǎn)，2007年在美國獲批用于治療犬惡性黑色素瘤）。

雖然許多人用的基因治療產(chǎn)品到達(dá)了臨床試驗(yàn)的末期，甚至完成了臨床試驗(yàn)，但是在歐盟和美國沒有一個(gè)基因治療產(chǎn)品拿到了上市許可。在2008年，Introgen Therapeutics的基因治療產(chǎn)品Advexin（用于治療頭頸部鱗狀細(xì)胞癌）雖然進(jìn)入了快速審批通道，但是FDAzui后還是否決了它的上市申請(qǐng)。Advexin是一個(gè)以基因工程改造過的腺病毒作為載體，攜帶著一個(gè)有功能的人p53基因拷貝。同年，因?yàn)闅W洲藥物管理委員會(huì)因?yàn)榭紤]到產(chǎn)品的質(zhì)量控制、有效性和安全性，也未批準(zhǔn)Advexin的上市申請(qǐng)。

zui近，核酸類藥物的上市前景遭遇了又一個(gè)挫折：2009年12月，EMA經(jīng)過討論后發(fā)布了對(duì)Cerepro的否定意見，zui終導(dǎo)致研發(fā)公司（Ark Therapeutics）在今年四月撤銷了Cerepro的上市申請(qǐng)。Cerepro采用腺病毒作為載體，攜帶一個(gè)單純皰疹病毒的胸苷激酶基因。在惡性膠質(zhì)瘤手術(shù)切除后，將Cerepro用于手術(shù)部位，Cerepro可將隨后注射的藥物前體*轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性產(chǎn)物，進(jìn)而殺滅手術(shù)后剩余的腫瘤細(xì)胞，提高療效。EMA之所以做出負(fù)面評(píng)價(jià)，是因?yàn)镃erepro未展現(xiàn)出足夠的有效性，基于風(fēng)險(xiǎn)-利益評(píng)估，不太可能批準(zhǔn)其上市。

目前，歐盟正在評(píng)估一份來自Amsterdam Molecular Therapeutics的基因治療藥物Glybera的上市申請(qǐng)。Glybera以基因工程改造過的腺病毒作為載體，攜帶人脂蛋白脂肪酶（LPL）基因，用于治療LPL缺乏癥。

反義和RNAi類產(chǎn)品也在發(fā)展之中。幾個(gè)RNAi類產(chǎn)品都處于臨床3期，如Isis公司生產(chǎn)的Mipomersen（針對(duì)載脂蛋白B）。今年二月，Isis宣布這個(gè)降*產(chǎn)品在臨床3期試驗(yàn)中達(dá)到了主要的臨床終點(diǎn)，但樂觀情緒隨即受到一些影響：因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)一些試驗(yàn)參與者的肝臟酶水平升高。

Genta公司的反義核酸產(chǎn)品Genasense仍在進(jìn)行其漫長的臨床3期試驗(yàn)。該藥是抑制BCL-2的產(chǎn)生，BCL-2被認(rèn)為是阻礙腫瘤細(xì)胞凋亡的。該藥可在多種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)治療方案中結(jié)合使用，其zui早是在2003年申請(qǐng)用于治療惡性黑色素瘤。兩年前，F(xiàn)DA要求Genta公司提供附加臨床數(shù)據(jù)，以支持其用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的申請(qǐng)。

*個(gè)RNAi類產(chǎn)品在2004年才進(jìn)入臨床試驗(yàn)；去年已經(jīng)做到臨床3期的bevasiranib（對(duì)VEGF進(jìn)行RNAi干擾，用于治療老年黃斑病變）遭遇失敗，這是RNAi產(chǎn)品遭遇的重大挫折。

對(duì)于反義核酸和基因治療，體內(nèi)藥物輸送仍然是本領(lǐng)域中主要的技術(shù)難點(diǎn)；對(duì)于siRNA治療產(chǎn)品提高其化學(xué)穩(wěn)定性是首要問題。然而，zui近在非實(shí)體瘤病人身上的一項(xiàng)試驗(yàn)證明（人數(shù)=3），系統(tǒng)地進(jìn)行siRNA給藥，抑制了一個(gè)腫瘤靶標(biāo)的表達(dá)。這給RNAi治療帶來了一線曙光。

生物制藥行業(yè)遠(yuǎn)景展望

蛋白質(zhì)治療藥物每年以7%-15%的增長率持續(xù)增長，到2013年藥物top5中可能有4個(gè)都會(huì)是蛋白類藥物。

雖然在未來幾年，很可能會(huì)有核酸類藥物獲批上市，但蛋白類（尤其是單抗類）將會(huì)是獲批上市的重點(diǎn)。目前，有240個(gè)單抗類產(chǎn)品、120個(gè)重組蛋白處于臨床試驗(yàn)階段。生物仿制藥也將在未來幾年大批上市。除了已經(jīng)設(shè)立生物仿制藥上市法規(guī)的西方國家外，生物仿制藥在新興市場迅猛發(fā)展，比如說中國和印度。中國的生物藥市場2008年已經(jīng)達(dá)到了100億美元，印度市場也達(dá)到了20億美元。

經(jīng)過工程改造過的產(chǎn)品所占上市產(chǎn)品中的比例也將上升。傳統(tǒng)的工程改造關(guān)注蛋白骨架，現(xiàn)今則更為關(guān)注翻譯后修飾。糖基化工程的進(jìn)步，可能會(huì)引導(dǎo)翻譯后修飾的潮流。今后可能會(huì)有細(xì)胞毒性優(yōu)化、糖基化工程修飾的抗體上市市場潮流。

現(xiàn)今干細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展預(yù)示著干細(xì)胞治療的廣闊前景，現(xiàn)今已有85個(gè)成人干細(xì)胞治療方案進(jìn)入臨床試驗(yàn)。將分化的體細(xì)胞誘導(dǎo)生成iPS是該領(lǐng)域開創(chuàng)性的工作，并且為細(xì)胞治療提供了廣泛的自體組織來源；并可促進(jìn)細(xì)胞替代治療方案的發(fā)展，因?yàn)樗鼪]有免疫排斥反應(yīng)。近期，科研人員還實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞定向轉(zhuǎn)化（從一種細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化為另一種細(xì)胞）。另外值得一提的是，近期發(fā)現(xiàn)通過表達(dá)3種細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，纖維母細(xì)胞可直接轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元。

總的來說，生物制藥行業(yè)的前景仍然是很光明的，而且現(xiàn)今不斷前進(jìn)的科研和革新為生物藥的發(fā)展提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。（滬宇生物）

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