"T4 DNA連接酶
別名：T4 DNA Ligase
規(guī)格：BR，1u/ul
包裝：LC200u
貨號：YY10594
CAS號：9015-85-4
保存條件：保存：-20℃

產(chǎn)品詳細資料如下：

英文名稱：T4 DNA Ligase
CAS號：9015-85-4
分子量：55.3kDa，單體
來源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
濃度：1u/ul（200CEU/ul）
活性定義：是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中，37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個weiss單位相當(dāng)于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位：20ul反應(yīng)體系（50mM Tris-HCL（PH7.5）, 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM（300ug/ml）的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL（PH7.6）, 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液組分：20mM Tris-HCL（PH7.5）, 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%（v/v）甘油
10×T4 DNA Ligase緩沖液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP（PH7.5,25℃）
抑制劑：當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時，可強烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意：T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉(zhuǎn)化時，連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細胞體積中的10%；電轉(zhuǎn)化之前，先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
質(zhì)量控制：測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測：粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途：科研、實驗。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù)；連接酶介導(dǎo)的RNA檢測；位點特異性突變；擴增片段長度多態(tài)性
貯存條件： -20°C貯存

相關(guān)試劑如下：
T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase/ BR，1u/ul,帶PEG LC200u
T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase/ BR，5u/ul 200u
T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase/ BR，30u/ul HC1000u
隨機引物/Random primers/ BR，5′（NNN NNN）3′ 1 O.D.
β-葡聚糖酶/β-Dextranase/ BR，50u/mg 5克
5´-核苷酸酶/5′-NT/9027-73-0 BR，200u/mg 100U
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷/X-GlcA/114162-64-0 超純，99% 25毫克
5-溴-4氯-3-吲哚N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/X-GalNAc/129572-48-1 超純，98% 25毫克
對硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷/PNPG/3150-24-1 超純，98% 1克
鄰硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷/ONPG/2816-24-2 生物技術(shù)級，98% 1克
對硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷/PNP-Nag/3459-18-5 生物技術(shù)級，99% 100毫克
對硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/4-Nitrophenyl N-acetyl-β-D-galactosaminide/14948-96-0 BR，98% 250毫克
*還原酶/Glutathione Reductase from baker's yeast/9001-48-3 BR，100-300u/mg 200U

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