全組織三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

全組織三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結合，經(jīng)過氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)組織樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物組織的酶活性檢測。也可用于人體肌肉組織纖維的分型鑒定。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

技術背景

三磷酸腺苷酶或ATP酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP水解生成ADP及無機磷的反應，這一反應放出大量能量，用于運送離子進出細胞，同時供給生物體進行需能生命過程。它存在于生物細胞的多個部位，比如細胞質膜上和葉綠體類囊體膜上等，對整個生命的維持有著重要的作用。膜結合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶（plasma membrane calcium ATPase；PMCA）或肌質網(wǎng)/內(nèi)質網(wǎng)鈣泵ATP酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases；SERCA）、氫鉀ATP酶（hydrogen/potassium ATPase）或胃質子泵（gastric proton pump）等。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存反應液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

培養(yǎng)箱：用于反應孵育

光學顯微鏡：用于染色后觀察分析

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的反應液（Reagent B）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里融化，避免光照。然后進行下列操作：

• 樣本激活處理

• 準備1個6孔細胞培養(yǎng)板
• 放進新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長；如果過大，刀切處理一下）
• 將組織壓平
• 小心加入xx毫升堿性液（Reagent A），浸沒整個組織
• 小心抽去堿性液（Reagent A）
• 小心加入xx毫升反應液（Reagent B），浸沒整個組織
• 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘
• 小心抽去反應液（Reagent B）
• 小心加入xx毫升激活液（Reagent C），浸沒整個組織
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去激活液（Reagent C）
• 重復實驗步驟9至11二次

二、樣本染色處理

• 小心加入xx毫升置換液（Reagent D），浸沒整個組織
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去置換液（Reagent D）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent E），浸沒整個組織
• 室溫下孵育1分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）
• 小心加入xx毫升顯色液（Reagent F），浸沒整個組織
• 室溫下孵育30至60秒；或直至可見棕黑色
• 小心抽去顯色液（Reagent F）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent E），浸沒整個組織
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent E）
• 后續(xù)石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）
• 在光學顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色（如果復染，則細胞核為藍色）

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 操作時，須帶手套
• 用戶根據(jù)實際需求，按比例配制試劑用量
• 本產(chǎn)品可以用于鑒定人體肌肉纖維I型和II型：淺染為I型；深染為II型。如果需要進一步鑒定亞型或動物肌肉纖維分型，建議使用ATP酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒或ATP酶法冰凍切片動物肌肉組織分型染色試劑盒
• 組織染色注意不要過度
• 顯色孵育時間，根據(jù)樣品和酶活性強弱調整，通常為60秒
• 全組織染色存在其染色不均勻、組織內(nèi)部染色滲透困難等局限
• 可以使用有機溶劑（乙醇、二甲苯等）脫水、澄清等后續(xù)處理
• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰