細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

細(xì)胞琥珀酸脫氫酶（SDH）活性染色試劑是一種旨在使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過(guò)反應(yīng)系統(tǒng)的作用，組織樣本中酶活性部位呈現(xiàn)出藍(lán)黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種動(dòng)物和人體細(xì)胞樣品琥珀酸脫氫酶的活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，顯色清晰。

技術(shù)背景

琥珀酸脫氫酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環(huán)（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素，位于線粒體內(nèi)膜，參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個(gè)單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生延胡索酸（furmarate），通過(guò)黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）傳遞電子?；?/span>琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理，使用人工電子受體染料硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來(lái)自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH₂）的電子，而被還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)色或藍(lán)黑色甲暨色素。據(jù)此證明組織細(xì)胞琥珀酸脫氫酶的活性。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存染色液（Reagent B）和反應(yīng)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶(hù)自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

操作一、25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

染色開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取xx毫升染色液（Reagent B）到新的15毫升錐形離心管，加入xx微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 小心抽去25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 小心加入xx毫升染色工作液，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
• 小心抽去染色工作液
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8二次
• 小心加入xx毫升固著液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育15分鐘
• 小心抽去固著液（Reagent D）
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
• 即刻在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)琥珀酸脫氫酶的組織細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)黑色。

操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

染色開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 小心加入xx微升染色工作液，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
• 小心抽去染色工作液
• 小心加入xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8二次
• 小心加入xx微升固著液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育15分鐘
• 小心抽去固著液（Reagent D）
• 小心加入xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14二次
• 即刻在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)琥珀酸脫氫酶的組織細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)黑色。

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次（2個(gè)24孔板）或10次（10個(gè)25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶）操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 反應(yīng)液（Reagent C）避免反復(fù)凍融
• 陰性對(duì)照時(shí)，染色工作液不含有反應(yīng)液（Reagent C）
• 可以使用50毫摩爾丙二酸鈉（Sodium malonate）作為抑制劑
• 每次更換試劑溶液時(shí)，須抽干殘留液體
• 整個(gè)操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
• 染色孵育時(shí)間，根據(jù)樣品和酶活性強(qiáng)弱調(diào)整，通常為5至10分鐘
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：

• 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰