冰凍切片動(dòng)物肌肉組織(ATP)分型染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
主要用途
ATP 酶法冰凍切片動(dòng)物肌肉組織分型染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù)，在堿性或酸性條件下，由三磷
酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合，經(jīng)過(guò)氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)組織
樣本中酶活性部位的不同深淺棕色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證
明的。主要適用于動(dòng)物組織冰凍切片的酶活性檢測(cè)，即動(dòng)物肌肉組織纖維的分型鑒定。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即
到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。
技術(shù)背景
三磷酸腺苷酶或ATP 酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP 水解生成ADP 及無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，
這一反應(yīng)放出大量能量，用于運(yùn)送離子進(jìn)出細(xì)胞，同時(shí)供給生物體進(jìn)行需能生命過(guò)程。它存在于生物細(xì)胞
的多個(gè)部位，比如肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)質(zhì)膜上，對(duì)整個(gè)生命的維持有著重要的作用。其中骨骼肌受到神經(jīng)沖動(dòng)的
刺激，肌漿內(nèi)鈣離子濃度升高，肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP 酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium
ATPases；SERCA）激活，分解ATP 釋放能量，肌肉收縮。動(dòng)物肌肉由兩種纖維構(gòu)成，即I 型或紅肌，又
稱(chēng)為慢纖維（slow twitch），和II 型或白肌，又稱(chēng)為（fast twitch）。I 型和II 型肌纖維混合鑲嵌排列成“棋
盤(pán)樣（checkerboard）”結(jié)構(gòu)。I 型和II 型纖維的比例取決于肌肉在機(jī)體中的位置和它的功能，相較于II
型肌，I 型肌的肌球蛋白含量高，線粒體多，毛細(xì)血管密度高，糖原低，適合于有氧呼吸，持久收縮。一
般的肌肉，其纖維分布是II 型纖維（60 至65%）2 倍于I 型纖維。通過(guò)有別于人體肌肉組織ATP 酶染色的
酸堿性，可以顯示動(dòng)物兩型肌纖維。三磷酸腺苷酶（ATP 酶）水解三磷酸腺苷為二磷酸腺苷和磷酸，并釋
放出能量。磷酸與鈣離子結(jié)合，在酶活性處形成無(wú)色的磷酸鈣，磷酸鈣經(jīng)氯化鈷處理形成磷酸鈷，再經(jīng)硫
化銨處理形成棕黑色的硫化鈷沉淀在酶活性部位。
產(chǎn)品內(nèi)容
堿性液（Reagent A） 毫升
酸性液（Reagent B） 毫升
反應(yīng)液（Reagent C） 毫升
激活液（Reagent D） 毫升
置換液（Reagent E） 毫升
清理液（Reagent F） 毫升
顯色液（Reagent G） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1 份
保存方式
保存反應(yīng)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保
證6 月
2
用戶(hù)自備
蘇木素復(fù)染試劑盒：用于常規(guī)染色后復(fù)染
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
小型染色缸：用于染色清洗操作
光學(xué)顯微鏡：用于染色后觀察分析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的反應(yīng)液（Reagent C）從－20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里融化，避免光照。然
后進(jìn)行下列操作：
一、樣本激活處理
1． 取出2 片待測(cè)的5 至10 微米厚的冰凍組織切片，標(biāo)記為1 和2（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)3 和4）
2． 小心加上x(chóng)x 微升堿性液（Reagent A）在1 號(hào)切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
3． 室溫下孵育15 分鐘
4． 同時(shí)小心加上x(chóng)x 微升酸性液（Reagent B）在2 號(hào)切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
5． 室溫下孵育5 分鐘
6． 小心移去2 號(hào)切片上的酸性液（Reagent B）
7． 加上x(chóng)x 微升堿性液（Reagent A）在2 號(hào)切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
8． 室溫下孵育30 秒
9． 小心移去1 號(hào)和2 號(hào)切片上的堿性液（Reagent A）
10．分別加上x(chóng)x 微升反應(yīng)液（Reagent C），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
11．放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育30 分鐘
12．小心移去反應(yīng)液（Reagent C）
13．小心加上x(chóng)x 微升激活液（Reagent D），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
14．室溫下孵育3 分鐘
15．小心移去激活液（Reagent D）
16．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13 至15 二次
二、樣本染色處理
1． 小心加上x(chóng)x 微升置換液（Reagent E），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
2． 室溫下孵育3 分鐘
3． 小心移去置換液（Reagent E）
4． 室溫下，小心將切片置入xx 毫升清理液（Reagent F）中孵育1 分鐘
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
6． 小心加上x(chóng)x 微升顯色液（Reagent G），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
7． 室溫下孵育30 至60 秒；或持續(xù)孵育直至可見(jiàn)淺棕和深棕色為止
8． 小心移去顯色液（Reagent G）
9． 室溫下，小心將切片置入xx 毫升清理液（Reagent F）中孵育2 分鐘
10．小心移去切片上的清理液（Reagent F）
3
三、（選擇步驟）樣本復(fù)染處理
1． 樣本復(fù)染處理（蘇木素）
2． 放上蓋玻片或封片
3． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察
肌纖維類(lèi)型1 號(hào)切片2 號(hào)切片
Ⅰ 淺棕色深棕色
ⅡA 深棕色淺棕色
ⅡB 深棕色中度棕色
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為20 次操作
2． 操作時(shí)，須帶手套
3． 建議組織快速冷凍，避免切片冰晶形成
4． 冰凍切片不可固定處理
5． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿(mǎn)樣品表面
6． 組織細(xì)胞染色注意不要過(guò)度
7． 可以使用有機(jī)溶劑（乙醇、二甲苯等）脫水、透明處理后封片
8． 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察，否則會(huì)逐漸褪色
9． 本公司提供系列特定組織染色試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰