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用戶自備 1.5 毫升離心管:用于樣品操作的容器 微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品染色操作的容器 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器:用于細(xì)胞計(jì)數(shù) 載玻片和蓋玻片:用于細(xì)胞爬片 (共聚焦)熒光顯微鏡:用于觀察染色的細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟2 1. 移取新鮮獲得的 1 毫升(48 小時(shí)內(nèi))到 1.5 毫升離心管 2. 放進(jìn) 37℃培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘 3. 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 600g 4. 小心抽去上清液 5. 加入 xx 毫升保存液(Reagent A),混勻顆粒群 6. 在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),并調(diào)整到 2 X 107 細(xì)胞/毫升 7. 移取 100 微升細(xì)胞到新的 1.5 毫升離心管 8. 加入 xx 微升染色液 A(Reagent B),混勻 9. 37℃溫度下孵育 10 分鐘,避免光照 10.小心加入 xx 微升染色液 B(Reagent E),混勻 11.37℃溫度下孵育 10 分鐘,避免光照 12.移取 50 微升到載玻片上 13.小心抽去染色液 14.蓋上蓋玻片 15.即刻在(共聚焦)熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)(注意:每個(gè)視野計(jì)數(shù) 200 個(gè)) 觀察綠色熒光—染色液 B(Reagent E):濾波器激發(fā)波長(zhǎng) 490nm,散發(fā)波長(zhǎng) 520nm 觀察紅色熒光—染色液 A(Reagent B):濾波器激發(fā)波長(zhǎng):488nm;散發(fā)波長(zhǎng):630nm 16.分析結(jié)果 分類
染色結(jié)果 意義 I 整個(gè)頭部呈現(xiàn)明亮綠色熒光 質(zhì)膜完整(intact) II 整個(gè)或部分頭部呈現(xiàn)紅色熒光 質(zhì)膜*損傷(damaged) III 整個(gè)頭部呈現(xiàn)橘黃色熒光 質(zhì)膜損傷
注意事項(xiàng) 1. 本產(chǎn)品為 20 次操作 2. 操作時(shí)須戴手套 3. 樣品檢測(cè)前,建議在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù) 4. 細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)乘上稀釋倍數(shù) 104。標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器(Hemocytometer)的計(jì)算方法是: 1 毫米方塊的細(xì)胞計(jì)數(shù) X 104(稀釋倍數(shù))=實(shí)際細(xì)胞數(shù)/毫升 5. 染色完成后,即刻進(jìn)行檢測(cè)分析 6. 本公司提供系列發(fā)育生物學(xué)相關(guān)檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
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