丙二醛（MDA）終點比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書 主要用途 丙二醛（MDA）終點比色法定量檢測試劑是一種旨在通過TBARS（硫代巴比妥酸反應(yīng)物）技術(shù)，檢測與之反應(yīng)的丙二醛，其產(chǎn)物丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物，在分光光度儀下，檢測其吸光峰值的變化，即采用比色法測定樣品中總丙二醛含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物、人體等細胞、組織、血液、體液、培養(yǎng)液丙二醛的含量檢測。廣泛用于細胞氧化應(yīng)急研究，特別是脂質(zhì)過氧化的分析。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，重復(fù)性好。 技術(shù)背景 脂質(zhì)過氧化反應(yīng)（lipid peroxidation；LPO）是動物和植物細胞損傷的一種機制，也是評價細胞和組織氧化應(yīng)急的標志。含有兩個或以上雙鍵（double bond）的多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid）對自由基以及其它活性氧化族高度敏感，導(dǎo)致產(chǎn)生脂質(zhì)過氧自由基LOO＋（lipid peroxyl radical），使脂類氧化（lipid oxidation）。脂質(zhì)過氧化自由基LOO＋同時通過攻擊分子內(nèi)雙鍵，經(jīng)環(huán)化、裂解形成環(huán)狀內(nèi)過氧化物（cyclic endoperoxide），例如丙二醛（malondialdehyde；MDA）。作為脂質(zhì)過氧化性低分子量終端產(chǎn)物之一的丙二醛，廣泛用于脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的指標。在丁羥甲苯（Butylated Hydroxytoluene；BHT）和EDTA的參與幫助減少干擾性脂類氧化的情況下，丙二醛與硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid；TBA）進行反應(yīng)，產(chǎn)生丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物（MDA－TBA2），通過分光光度儀（532nm波長）來定量分析丙二醛的含量，其反應(yīng)方式為： malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA－TBA2 產(chǎn)品內(nèi)容 抗干擾液（Reagent A） 500微升 萃取液（Reagent B） 1.25毫升 反應(yīng)液（Reagent C） 5管 補充液（Reagent D） 10毫升 稀釋液（Reagent E） 1.5毫升 產(chǎn)品說明書 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，抗干擾液（Reagent A）和反應(yīng)液（Reagent C）避免光照，并密封；萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月 用戶自備 恒溫培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育 酶標板：用于比色的容器 酶標儀：用于樣品比色分析 實驗步驟 實驗開始前，將試劑盒中的反應(yīng)液（Reagent C） 置入冰槽里。移取250微升稀釋液（Reagent E）到 反應(yīng)液（Reagent C）管里，渦旋混勻，標記為反應(yīng)工作液（10次操作量）。同時設(shè)定好酶標儀（溫度為25℃）：波長532nm，并置零。然后進行下列操作。 1．準備好1個96酶標板孔，并做好相應(yīng)標記：背景對照和樣品 2．分別移取140微升補充液（Reagent D） 3．分別加入10微升抗干擾液（Reagent A） 4．分別加入50微升補充液（Reagent D）或待測樣品（注意：總量為1至2毫克總蛋白） 5．用槍頭混勻 6．分別加入25微升萃取液（Reagent B） 7．用槍頭混勻 8．分別加入25微升反應(yīng)工作液 9．輕輕搖動酶標板，混勻 10．放進60℃恒溫培養(yǎng)箱，孵育60分鐘 11．放進酶標儀檢測 12．樣品實際讀數(shù)：（樣品讀數(shù)－背景對照讀數(shù)） 13．計算樣品總濃度 [樣品實際讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X 0.25（毫升，測定容量）]÷[0.05（樣品容量，毫升）X 156（毫摩爾吸光系數(shù)）X 0.6]＝微摩爾/毫升÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝微摩爾/毫克 注意事項 1．本產(chǎn)品為50次（96孔板）操作 2．操作時，須戴手套 3．萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全 4．反應(yīng)液（Reagent C）為固體，避免在室溫下放置；配制后，有效期1周 5．抗干擾液（Reagent A）和反應(yīng)液（Reagent C）避免光照，并密封 6．本產(chǎn)品檢測敏感度可達0.05微摩爾丙二醛 7．50微摩爾的過氧化氫會干擾檢測（使丙二醛減少13％）；而蔗糖和果糖則不影響檢測 8．如果樣品含有過高的蛋白成分，建議進行樣品去蛋白處理 9．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度 10．正常樣品的丙二醛濃度相當?shù)停s在皮摩爾水平，即10至100皮摩爾/毫克蛋白 11．本公司提供系列丙二醛檢測試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標準 1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感