人孤菲肽原(PNOC)ELISA試劑盒ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
2、酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
3、酶的底物;
4、陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);
5、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
6、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
人孤菲肽原(PNOC)ELISA試劑盒ELISA試劑盒在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問題,子科生物技術(shù)部根據(jù)多年研發(fā)和臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下:
1、試劑盒特異性因素
1)固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時(shí)要對(duì)其使用的微孔板型號(hào)進(jìn)行認(rèn)證,評(píng)估。
2)包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測(cè)定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術(shù)條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能提高純度,提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。
3)包被抗體的效價(jià)。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。
4 )封閉。是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙[2],減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。
2、操作過程中的問題造成假陽性
1)加樣
對(duì)于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。
2)洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3) 溫育
每種試劑都有其佳反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
4)酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,使用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同。
人孤菲肽原(PNOC)ELISA試劑盒ZK-R3248 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒 Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3249 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 Rat Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3250 大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒 Rat E-Selectin ELISA kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3251 大鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒 Rat Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3252 大鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒 Rat angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3253 大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒 Rat hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3254 大鼠低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)ELISA試劑盒 Rat Hypoxia Inducible Factor 2 Alpha (HIF2a) ELISA Kit ZIKER子科生物
ZK-R3255 大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒 Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3256 大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒 Rat aGT ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3257 大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒 Rat α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3258 大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒 Rat 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3259 大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒 Rat Endometrium Antibody,EMAb ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3260 大鼠內(nèi)毒素(ET)ELISA試劑盒 Rat endotoxin,ET ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3261 大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒 Rat anti-cardiolipin antibody IgG,ACA-IgG ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3262 大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒 rat anti-cardiolipin antibody IgM,ACA-IgM ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物
ZK-R3263 大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒 Rat anti-cardiolipin antibody IgA,ACA-IgA ELISA Kit ELISA. 96T/48T ZIKER子科生物