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鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒

時(shí)間:2017-3-3閱讀:175
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鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
☆試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
☆加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見(jiàn)的時(shí)間間隔過(guò)大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過(guò)多,可使用多道移液器。
☆孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
☆洗滌:洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
☆反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
☆建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
☆建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),可和所購(gòu)經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒操作步驟

1、 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2、 取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水;
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對(duì)照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5、在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對(duì)照孔)
6、將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí);(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干;
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對(duì)照孔)
10、各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);10、20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;

結(jié)果判斷
1、30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;
2、以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;
3、根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍;

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