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小鼠游離三碘甲狀腺原氨酸（Free-T3）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

1.試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，10分鐘左右)，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本)，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí)；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；

結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍；

小鼠游離三碘甲狀腺原氨酸（Free-T3）ELISA試劑盒尿素培養(yǎng)基    3ml×10 支/盒
尿素培養(yǎng)基    1ml×10 支/盒
半固體瓊脂管    1ml×10 支/盒
緩沖葡萄糖蛋白胨水    1ml×10 支/盒
鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)    1ml×10 支/盒
賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)    1ml×10 支/盒
氨基酸脫羧酶試驗(yàn)對照    1ml×10 支/盒
無菌液體石蠟    2ml×10 支/盒
甘露醇發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
棉子糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
山梨醇發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
鼠李糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
蔗糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂斜面    4ml×10 支/盒
改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基斜面（限供汽運(yùn)）    10ml×20 支/箱
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌套裝生化鑒定管10種（GB 4789）    12 支/套×10 套
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌套裝生化鑒定管  8 種（SN0174）    10 支/套×10 套
SIM 動(dòng)力試驗(yàn)管    1.5ml×10 支/盒
緩沖葡萄糖蛋白胨水    1ml×10 支/盒
甘露醇發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
鼠李糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
葡萄糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
麥芽糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
木糖發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
七葉苷發(fā)酵管    1ml×10 支/盒
3%過氧化氫溶液    2ml×10 支/盒
硝酸鹽肉湯    5ml×10 支/盒
三糖鐵(TSI)瓊脂斜面    4ml×10 支/盒
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌套裝生化鑒定管 10種（GB 4789）    10 支/套×10 套
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌套裝生化鑒定管 12種（SN0184）    12 支/套×10 套