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大鼠游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒血清樣本采集和檢測注意事項(xiàng):
1、血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。
2、 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。
3、一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。
大鼠游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測定 OD值。
標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
特級胎牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
優(yōu)級新生牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
特級新生牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
標(biāo)準(zhǔn)大牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
標(biāo)準(zhǔn)小牛血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
標(biāo)準(zhǔn)馬血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
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標(biāo)準(zhǔn)山羊血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
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標(biāo)準(zhǔn)豬血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
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標(biāo)準(zhǔn)小鼠血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
標(biāo)準(zhǔn)大鼠血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
標(biāo)準(zhǔn)豚鼠血清(無菌過濾、熱滅活) 100ml/500ml/500ml*20
動物血漿系列
胎牛血漿(去紅細(xì)胞、無菌過濾) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
兔血漿(去紅細(xì)胞、無菌過濾) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
新生牛血漿(去紅細(xì)胞、無菌過濾) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
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大鼠血漿(去紅細(xì)胞、無菌過濾) 100ml/200ml/500ml
小鼠血漿(去紅細(xì)胞、無菌過濾) 100ml/200ml/500ml
豚鼠血漿(去紅細(xì)胞、無菌過濾) 100ml/200ml/500ml
粗制動物血清
粗制胎牛血清 10000ml/壺
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粗制新生牛血清(低內(nèi)毒素) 10000ml/壺
粗制新生牛血清 10000ml/壺
粗制小牛血清 10000ml/壺
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粗制大鼠血清 500ml/瓶
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