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大鼠游離三碘甲腺原氨酸(TT3)ELISA檢測試劑盒試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過了夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
操作步驟
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
客戶購買子科生物試劑盒須知:
1、子科生物所提供的試劑產(chǎn)品,均為科研試劑,僅供科研使用,不得用于注射、藥品、食用,血更不能用于臨床檢測和動物防疫檢測或其他用途,對此造成的任何利潤與損失、間接損失、損害承擔(dān)責(zé)任經(jīng)濟糾紛,我司不承擔(dān)任何責(zé)任。
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3、我們向您保證我們提供的產(chǎn)品均經(jīng)過鑒定為合格產(chǎn)品,如果真的有任何質(zhì)量問題,請您在收到產(chǎn)品1個月內(nèi)以書面的形式及時通知我司,超過時間不予受理,我們將給您提供*周到及時的技術(shù)售后處理。ZIKER-0736R Anti-CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1) 神經(jīng)細胞粘附分子1抗體(Elisa IP IHC 用)
ZIKER-0805R Anti-CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1) 神經(jīng)細胞粘附分子1抗體
ZIKER-1036R Anti-CD62L (ELAM-1/L-Selectin ) L選擇素抗體
ZIKER-1273R anti-E-Selectin E選擇素抗體
ZIKER-0649R Anti-CD68(Rabbit Anti-Mouse rat CD68 Palyclonal Antibody) CD68抗體(用于大鼠、小鼠)
ZIKER-0372R Anti-CD73(5´-nucleotidase cytosolicⅡ) 胞漿-5´-核苷酸酶-Ⅱ抗體
ZIKER-0298R Anti-CD79A/IGBP-1(Immunoglobuin binding protein-1) 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體
ZIKERh-0558M Anti-CD8(Mouse Anti-Human CD8 Monoclonal Antibody) 鼠抗人CD8單克隆抗體
ZIKER-0648R Anti-CD8(Rabbit Anti-Human Mouse rat CD8 Palyclonal Antibody) CD8抗體
ZIKER-1035R Anti-CD86/B7-2 CD86抗體
ZIKER-0542R Anti-CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1) 周期素依賴性激酶1抗體
ZIKER-0757R Anti-CDK2 (Cyclin-Dependent Kinase 2) 周期素依賴性激酶2抗體
ZIKER-0633R Anti-CDK4 (cyclin-dependent kinase 4) 周期素依賴性激酶4抗體
ZIKER-0559R Anti-CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) 周期素依賴性激酶5抗體
ZIKER-0568R Anti-CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) 周期素依賴性激酶6抗體
ZIKER-0569R Anti-CDK7(Cyclin Dependent Kinase 7) 周期素依賴性激酶7抗體
ZIKER-0570R Anti-CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依賴性激酶8抗體
ZIKER-0538R Anti-Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體
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ZIKER-0060R Anti-CEA (CaZIKERinoembryonic Antigen ) 人癌胚抗原抗體
ZIKER-0744R Anti-CEAcam8/CD67 (caZIKERinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8) 癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子8抗體
ZIKER-0125R Anti-C-erbB-2(HER2/NEU) c-erbB-2(HER2/NEU)抗體
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ZIKER-0469R Anti-c-fos 即刻早期基因(原癌基因)抗體
ZIKER-1277R anti-CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗體
ZIKER-0539R Anti-CGA(Chromogranin A) 嗜鉻粒素A抗體
ZIKER-0543R Anti-CGB(Chromogranin B) 嗜鉻粒素B抗體