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豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒標(biāo)本的處理
可用作 ELISA 測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、 細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定,有些 則需經(jīng)預(yù)處理。
● 血清:
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如 有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
● 血漿:
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。
●尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成, 應(yīng)再次離心。
●細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集 上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí),用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
●細(xì)胞:
檢測(cè)細(xì)胞的成份時(shí),對(duì)于貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10 秒后,細(xì)胞 就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉 淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上 清,即可進(jìn)行后續(xù)操作。
●組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
有兩種設(shè)定空白對(duì)照的方案:
(1)將 TMB 空白顯色孔設(shè)為對(duì)照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去 TMB 空白顯色孔的 吸 光 值 后 , 在 坐 標(biāo) 紙 上 畫 出 曲 線 , 以 吸 光 值 作 為 縱 坐 標(biāo) , 以 濃 度 作 為 橫 坐 標(biāo) 。
(2)將零孔設(shè)為對(duì)照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數(shù)據(jù)可以 直接在坐標(biāo)紙上畫出曲線。
相關(guān)產(chǎn)品如下:Fluorescein 熒光素 1 g 現(xiàn)貨 2321-07-5 C20H12O5 332.31 490 514 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月
Fluorescein, disodium salt 熒光素二鈉鹽 100 mg 現(xiàn)貨 518-47-8 C20H10Na2O5 376.28 490 514 Water −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 橙紅色粉末,易溶于水,微溶于醇。
3-Cyano-7-hydroxycoumarin 3-氰基-7-羥基香豆素 100 mg 1~2周 19088-73-4 C10H5NO3 187.15 408 450 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 溶于DMF
7-Hydroxy-4-methylcoumarin 7-羥基-4-甲基香豆素 5 g 1~2周 90-33-5 C10H8O3 176.17 360 450 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 微黃色或黃色結(jié)晶性粉末,溶于水及氫氧化鈉
7-Hydroxy-4-methylcoumarin 7-羥基-4-甲基香豆素 100 g 1~2周 90-33-5 C10H8O3 176.17 360 450 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 微黃色或黃色結(jié)晶性粉末,溶于水及氫氧化鈉
7-Hydroxy-4-methylcoumarin 7-羥基-4-甲基香豆素 500 g 1~2周 90-33-5 C10H8O3 176.17 360 450 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 微黃色或黃色結(jié)晶性粉末,溶于水及氫氧化鈉
AMC [7-Amino-4-methylcoumarin] 7-氨基-4-甲基香豆素;香豆素120 5 g 現(xiàn)貨 26093-31-2 C10H9NO2 175.18 351 430 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 用于痕量檢測(cè)酶
AMC [7-Amino-4-methylcoumarin] 7-氨基-4-甲基香豆素;香豆素120 25 g 現(xiàn)貨 26093-31-2 C10H9NO2 175.18 351 430 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 用于痕量檢測(cè)酶
AFC [7-Amino-4-trifluoromethylcoumarin] 7-氨基-4-三氟甲基香豆素;香豆素151 5 g 現(xiàn)貨 53518-15-3 C10H6F3NO2 229.20 380 500 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 用于標(biāo)記多肽,溶于DMSO
AFC [7-Amino-4-trifluoromethylcoumarin] 7-氨基-4-三氟甲基香豆素;香豆素151 25 g 現(xiàn)貨 53518-15-3 C10H6F3NO2 229.20 380 500 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 用于標(biāo)記多肽,溶于DMSO
Nile Blue A 耐爾藍(lán)A;尼羅藍(lán)硫酸鹽;耐爾藍(lán) 25 g 現(xiàn)貨 3625-57-8 2C20H20N3O · SO4 732.85 633 672 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 綠色結(jié)晶性粉末,用于生物染色,區(qū)別脂肪酸和中性脂肪,病理組織中細(xì)菌和放線菌染色。也用于鉭的光度測(cè)定。在中和分析中用以制備混合指示劑。
Pyronin Y 派洛寧Y 5 g 1~2周 92-32-0 C17H19ClN2O 302.80 546 549 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月
Pyronin Y 派洛寧Y 10 g 1~2周 92-32-0 C17H19ClN2O 302.80 546 549 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月
Resorufin, sodium salt 7-羥基吩惡嗪酮 5 g 現(xiàn)貨 34994-50-8 C12H6NNaO3 235.17 571 585 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月
Rhodamine 110 羅丹明110 1 g 現(xiàn)貨 13558-31-1 C20H14N2O3 · HCl 366.80 498 520 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 溶于DMSO
Rhodamine 700 羅丹明700 25 mg 1~2周 643 664 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 溶于DMSO
Rhodamine 800 羅丹明800 250 mg 1~2周 101027-54-7 C26H26ClN3O 431.96 682 698 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 溶于DMSO
Rhodamine B 羅丹明B 100 g 1~2周 81-88-9 C28H31ClN2O3 479.01 552 588 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 溶于DMSO
Rhodamine 6G 羅丹明6G 100 g 1~2周 989-38-8 C28H31N2O3Cl 479.01 530 556 DMSO −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 溶于DMSO
Sulforhodamine 101 磺基羅丹明101 500 mg 1~2周 60311-02-6 C31H30N2O7S2 606.71 586 605 Water −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 用于標(biāo)記蛋白、多肽及抗體,溶于DMF及DMSO
Sulforhodamine B 磺基羅丹明B 5 g 1~2周 3520-42-1 C27H29N2NaO7S2 580.65 556 575 Water −20°C干燥避光保存 12個(gè)月 用于標(biāo)記蛋白、多肽及抗體,溶于DMF及DMSO