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細(xì)胞STR鑒定背景介紹

時(shí)間:2017-2-24閱讀:411
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細(xì)胞STR鑒定背景介紹:

在過(guò)去的 45 年里,細(xì)胞生物學(xué)方面的數(shù)據(jù)一直在發(fā)表,但是應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的哺乳動(dòng)物細(xì)胞被錯(cuò)誤鑒定和交叉污染的問(wèn)題,一直是一個(gè)普遍存在的突出問(wèn)題。早在1970年代,一項(xiàng)研究就發(fā)現(xiàn),被廣泛使用的Hela細(xì)胞系就曾被污染,這一事件當(dāng)時(shí)就促使*細(xì)胞系質(zhì)量控制手冊(cè)的誕生。HeLa細(xì)胞株是由正常子宮頸細(xì)胞被一 人類(lèi)乳突狀瘤病毒(Human Papillomavirus 18或HPV18)轉(zhuǎn)型成癌細(xì)胞的,而且和正常子宮頸細(xì)胞有許多不同。

從那時(shí)候開(kāi)始,細(xì)胞身份鑒定成 一個(gè)受科學(xué)家關(guān)注的問(wèn)題,也是從那時(shí)候開(kāi)始越來(lái)越多的細(xì)胞被污染事件開(kāi)始出現(xiàn)。人們已經(jīng)開(kāi)始意識(shí)到細(xì)胞被污染的問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染的原因和預(yù)防措施也已經(jīng)被公布,然而問(wèn)題卻一直有增無(wú)減,研究人員繼續(xù)發(fā)表從錯(cuò)誤鑒定和交叉污染的細(xì)胞系所獲取的數(shù)據(jù)。

據(jù)估計(jì), 國(guó)外實(shí)驗(yàn)室已建株細(xì)胞有接近 20% 存在上述問(wèn)題, 有 15-25% 的研究論文因?yàn)槭褂昧吮诲e(cuò)誤辨識(shí)和交叉污染的細(xì)胞而導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。這造成大量研究經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi),并產(chǎn)生了大量無(wú)效或錯(cuò)誤數(shù)據(jù)。

2008年,Josephine Nefkens研究所的分子生物學(xué)家Winand Dinjens與同事發(fā)現(xiàn)食管腺癌細(xì)胞其實(shí)與食管扁平細(xì)胞癌細(xì)胞系具有相似的基因型。這些結(jié)果促使他們開(kāi)始關(guān)注細(xì)胞身份問(wèn)題。 Dinjens開(kāi)始驗(yàn)證這些細(xì)胞系,將它們與原始的組織進(jìn)行基因型比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn),這些細(xì)胞系與原始組織細(xì)胞已經(jīng)有不同的基因型。

在13株食管腺癌細(xì)胞系中,其中3株:SEG-1,BIC-1和SK-GT-5被污染,這些細(xì)胞株混合有其他癌細(xì)胞。這些細(xì)胞系已經(jīng)被多家實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用在兩個(gè)臨床試驗(yàn)、并發(fā)表了超過(guò)100篇SCI文章,并申請(qǐng)了11個(gè)美國(guó),這一研究結(jié)果被發(fā)布在一期的Journal of the National Cancer Institute(JNCI)。

2007 年 NIH發(fā)布了通知,強(qiáng)烈建議在使用培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候進(jìn)行鑒定(authentication)。2008 年底,專(zhuān)家提議ATCC致力于人源細(xì)胞系的鑒定工作,并制定鑒定的標(biāo)準(zhǔn)程序。

近年來(lái),大量研究表明 STR 基因分型 方法是進(jìn)行細(xì)胞交叉污染和性質(zhì)鑒定的zui有效和準(zhǔn)確的方法之一,STR基因分型應(yīng)用于細(xì)胞鑒定已被ATCC等機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈*。美國(guó)的ATCC 細(xì)胞庫(kù)、德國(guó)的DSMZ細(xì)胞庫(kù)以及日本的JCRB細(xì)胞庫(kù)等為STR 分型提供了各細(xì)胞株的數(shù)據(jù)供比對(duì)。

標(biāo)準(zhǔn)的制定:

2011年初,美國(guó)菌種保藏中心(ATCC)制定了人源細(xì)胞系STR鑒定標(biāo)準(zhǔn),旨在約束因細(xì)胞交叉污染和錯(cuò)誤辨識(shí)所導(dǎo)致的無(wú)效科研數(shù)據(jù)的不斷擴(kuò)增。更重要的是,細(xì)胞系的鑒定在研發(fā)基于細(xì)胞下的醫(yī)學(xué)產(chǎn)品時(shí)起到至關(guān)重要的作用,它能避免將人體細(xì)胞暴露于錯(cuò)誤鑒定細(xì)胞中的風(fēng)險(xiǎn)。

您是否有過(guò)這樣的經(jīng)歷……

在科研工作結(jié)束之際,被你所投稿的雜志要求提供細(xì)胞鑒定報(bào)告,而此時(shí)你研究中使用的細(xì)胞是否被污染,將決定你幾個(gè)月甚至長(zhǎng)達(dá)幾年的科研工作的成敗。

您是否有過(guò)這樣的經(jīng)歷……

新買(mǎi)到的細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)室傳了幾代的細(xì)胞,又或者儲(chǔ)存于超低溫冰箱幾年不用的細(xì)胞, 被污染了么? 鑒定正確么?用它做研究會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果么?

沒(méi)有經(jīng)過(guò)相應(yīng)的細(xì)胞鑒定,使用了被污染的細(xì)胞,花費(fèi)了大量的時(shí)間、物力和人力,寫(xiě)出了一篇論文,但是結(jié)論被推,論文被召回,大量的時(shí)間、物力和人力都被浪費(fèi),一切都要從頭再來(lái)。如果你是等待畢業(yè)的學(xué)生,等待你的將是延期畢業(yè)。

選擇正確的細(xì)胞,是實(shí)驗(yàn)成功的一半

細(xì)胞是一種很特殊的商品,由于其具有可復(fù)制性,因此很容易被一些商家自行復(fù)制后再出售,而這些自行傳代復(fù)制的細(xì)胞幾乎*,所以很容易引起大家購(gòu)買(mǎi)。但是這些細(xì)胞傳代的次數(shù)、培養(yǎng)的條件以及是否有污染等都無(wú)法得到保障,甚至有老師買(mǎi)了這種細(xì)胞做了很多的實(shí)驗(yàn)都沒(méi)有結(jié)果,很長(zhǎng)時(shí)間之后才發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被污染了。

大部分生物實(shí)驗(yàn)都需要一個(gè)大量的時(shí)間、精力和金錢(qián)的過(guò)程,為了讓您的時(shí)間、精力、財(cái)力不會(huì)因?yàn)槭褂昧隋e(cuò)誤的細(xì)胞而浪費(fèi),我們建議您在實(shí)驗(yàn)之前,對(duì)您所使用的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞鑒定,以確保您使用的細(xì)胞的正確性,讓您的實(shí)驗(yàn)有一個(gè)良好的開(kāi)端。

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