X-Gluc 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽（X-beta-D- glucuronide CHA salt）

——轉(zhuǎn)基因植物zui常用報(bào)告基因GUS顯色底物，GUS染色定性研究

搜索關(guān)鍵詞：β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）, 藍(lán)色顯色底物, 轉(zhuǎn)基因植物GUS表達(dá), GUS染色（定性）, 報(bào)告基因gusA（uidA）, 活性檢測,  CAS：114162-64-0

作用機(jī)制：

X-Gluc，也稱為5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronide（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸），是β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）的顯色底物，由一種廣泛使用的報(bào)告基因gusA（uidA）所編碼。GUS水解X-Gluc，生成一種無色的葡萄糖醛酸和一種肉眼可見的氯-溴靛藍(lán)（chloro-bromoindigo）深藍(lán)色沉淀。利用這一特性，X-Gluc常用來檢測植物細(xì)胞和組織中的GUS表達(dá)；另外，X-Gluc還能用來檢測大腸桿菌引起的感染狀況；或檢測食物或水源是否受細(xì)菌污染。

主要應(yīng)用：轉(zhuǎn)基因植物報(bào)告基因GUS活性檢測，X-gluc用作顯色底物。

普遍應(yīng)用優(yōu)勢在于：絕大多數(shù)植物細(xì)胞內(nèi)不存在內(nèi)源性的GUS活性，而且GUS基因表達(dá)產(chǎn)物具有檢測方法簡單、靈敏度高，易于定量及定性分析，能夠與其他蛋白質(zhì)基因融合等優(yōu)勢，因此，GUS基因?yàn)橹参锕こ萄芯恐袘?yīng)用zui廣泛的報(bào)告基因（報(bào)道基因）之一。

1. GUS活性檢測（組織化學(xué)定位法，定性研究）

GUS催化底物X-gluc在酶活性位點(diǎn)生成深藍(lán)色沉淀，為研究外源基因在植物中表達(dá)具體部位研究提供很好的研究手段。且GUS酶和顯色產(chǎn)物非常穩(wěn)定，植物中可以積累。

1. GUS染色液制備【作為參考，可按照具體實(shí)驗(yàn)條件來調(diào)整】

2. GUS定性染色步驟

1. GUS活性檢測（熒光分析法，定量研究）

GUS催化熒光底物MUG 4-甲基傘型酮-beta-D-葡糖苷酸，將其水解為4-MU（4-甲基傘型酮）和β-D-葡萄糖醛酸。4-MU中的羥基解離后在365nm的光激發(fā)下產(chǎn)生455nm的熒光。此時(shí)用熒光分光光度計(jì)測定得到的是相對值，因此同時(shí)需要用標(biāo)準(zhǔn)物4-MU進(jìn)行校準(zhǔn)。

熒光定量分析GUS活性有兩種基本方法：1）在一個時(shí)間點(diǎn)測定GUS酶作用產(chǎn)物的總熒光量，需要設(shè)定空白對照，以消除內(nèi)源熒光強(qiáng)度；2）測定一段時(shí)間內(nèi)GUS的動力學(xué)過程。在酶反應(yīng)初始階段，酶作用產(chǎn)物與時(shí)間呈線性關(guān)系，而內(nèi)源性熒光物質(zhì)的熒光量與時(shí)間無線性關(guān)系。由此可計(jì)算GUS酶活力。GUS酶活性通常以μg MU/min/mg蛋白質(zhì)。有時(shí)也可以用樣本的鮮重來表示。

基本特性：

1. CAS NO：114162-64-0

2. 英文同義名：5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucuronic acid, cyclohexylammonium salt; X-beta-D- glucuronide CHA salt; X-Gluc CHA Salt; X-glu CHA Salt; X-glcA CHA Salt; BCIG CHA Salt;

3. 分子式：C₁₄H₁₃BrClNO₇ • C₆H₁₃N

4. 分子量：521.79 g/mol

5. 純度：＞99%（HPLC）

6. 外觀：白色至類白色結(jié)晶性粉末

7. 溶解性：DMF、甲醇

8. 化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

相關(guān)產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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X-Gluc 克隆與表達(dá)分析

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