M0877 MarkerGene^TM GUS報告基因活性檢測試劑盒（熒光法）

MarkerGene^TM Glucuronidase (GUS) Reporter Gene Activity Detection Kit

搜索關(guān)鍵詞：

β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS），藍色熒光底物，轉(zhuǎn)基因植物GUS表達，GUS活性（定量），報告基因gusA（uidA），MUG，CAS：6160-80-1

背景描述：

報告基因普遍用做“標志物 Markers"對基因調(diào)控和定位分析，以及突變基因分析。通過免疫實驗，生化活性或組織化學分析來對組織或細胞的報告基因表達進行檢測。

大腸桿菌來源的β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）普遍認為是轉(zhuǎn)基因植物研究中非常理想的報告基因（marker gene）。GUS報告基因系統(tǒng)具有許多優(yōu)勢，包括穩(wěn)定表達大腸桿菌GUS，不會干擾正常植物代謝和高等植物內(nèi)幾乎無內(nèi)源性GUS活性。

數(shù)種葡萄糖醛酸底物可用來檢測GUS表達，這些底物都包含糖基D-葡萄糖醛酸苷（D-glucopyranosiduronic acid）通過糖苷鍵連接到生色底物、熒光底物或其他檢測分子的—OH。體外用于GUS活性檢測的zui廣泛使用的熒光底物為MUG（4-Methylumbelliferyl beta-D-glucuronide，4-甲基傘型酮-beta-D-葡糖苷酸，CAS：6160-80-1或881005-91-0）。一旦被水解，生成熒光素4-MU（4-甲基傘型酮）和β-D-葡萄糖醛酸。

檢測原理：

本MarkerGene^TM GUS報告基因活性檢測試劑盒（MarkerGene^TM Glucuronidase (GUS) Reporter Gene Activity Detection Kit）以MUG為熒光顯色底物。當植物或其他細胞用GUS萃取液（含磷酸-EDTA，pH 7.0和去污劑）萃取后，所得到的萃取液（含GUS）能水解4-MUG生成4-MU（4-甲基傘型酮，pKa 8.2）和β-D-葡萄糖醛酸。加入碳酸鈉緩沖液終止該反應（因4-MU在pH值高于pKa的情況下發(fā)射zui大熒光信號）。4-MU的zui大激發(fā)波長為365nm，zui大發(fā)射波長為455nm。

試劑盒組分：

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