iFluor 647 Phalloidin iFluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

產(chǎn)品標(biāo)簽

Phalloidin 鬼筆環(huán)肽；F-actin 肌動(dòng)蛋白（聚合）；G-actin 球形肌動(dòng)蛋白（單體）；Actin Polymerization 肌動(dòng)蛋白聚合；Cytochalasin細(xì)胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4；

產(chǎn)品信息

【溫馨提示】：見我司整理的鬼筆環(huán)肽及衍生物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品描述

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱鬼筆鵝膏素，zui初是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七肽毒素，以*的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動(dòng)蛋白），不會(huì)結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白（G-actin）。不像肌動(dòng)蛋白抗體，同時(shí)識(shí)別單體和聚合形式的肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽對大小纖維的親和力相近，在許多不同的動(dòng)植物物種的肌肉和非肌肉細(xì)胞中，基本都按照一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的化學(xué)計(jì)量比結(jié)合。不像肌動(dòng)蛋白抗體，對不同物種或來源的肌動(dòng)蛋白親和力會(huì)發(fā)生明顯變化。鬼筆環(huán)肽的非特異性結(jié)合幾乎可忽略，染色和未染色區(qū)域的差異極其明顯。鬼筆環(huán)肽使得肌動(dòng)蛋白聚合/解離的臨界濃度降至1μg/ml，可用作一種聚合增強(qiáng)劑。另外，產(chǎn)生的復(fù)合物高度穩(wěn)定（解離常數(shù)約3×10^–8 M），能夠抑制細(xì)胞松弛素、碘化鉀和溫度上升引起的去聚合和去組裝活性。

鬼筆環(huán)肽及其衍生物在納摩爾濃度即可對F-actin染色，且水溶性良好，是非常實(shí)用和方便的探針，對組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞體系內(nèi)的F-actin進(jìn)行定性和定量研究。另外，鬼筆環(huán)肽及其衍生物很小，直徑約12–15 Å，分子量<2000 Da，經(jīng)標(biāo)記后的F-actin仍維持許多標(biāo)記前的功能。比如，標(biāo)記的甘油抽提肌纖維仍能收縮；標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白絲仍能在固相肌球蛋白基質(zhì)中移動(dòng)。

本品為iFluor 647熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽（iFluor 647-Phalloidin），以溶于DMSO的儲(chǔ)存液形式提供，按照100µl/孔（96孔板），總共可做300次。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）選擇性染色F-actin，優(yōu)于抗體染色法，具更高的特異性和更低的非特異背景。

2）優(yōu)秀的熒光亮度和穩(wěn)定性，類同于Alexa Fluor 647-Phalloidin，Ex/Em=650/665nm。

3）優(yōu)化用于固定和透化處理樣本。

4）適用于多重標(biāo)記應(yīng)用，與其他熒光染料包括熒光蛋白、Qdot熒光納米晶和其他包括二抗在內(nèi)的熒光偶聯(lián)物*兼容。

注意事項(xiàng)

1）本品具有一定的毒性，LD₅₀=2mg/kg，操作時(shí)請注意防護(hù)。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作流程（免疫熒光染色）【詳見懋康整理】

有幾種方法都能用來染色組織細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)的肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）染色，其中，固定步驟在獲得可信且具代表性的細(xì)胞F-actin分布情況中至關(guān)重要。固定步驟基于實(shí)驗(yàn)自身需求來選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優(yōu)秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。

一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

二、染色工作液準(zhǔn)備

 三、染色流程（以96孔板為例）

3.1 用黑框/透明底的96孔板進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，使其貼壁生長達(dá)到70-80%的匯合度。

3.2 吸掉培養(yǎng)液，用37℃預(yù)熱的1×PBS Buffer（pH 7.4）清洗細(xì)胞2次。

3.3 用溶于PBS的4%多聚甲醛固定細(xì)胞，室溫固定10-30min。【注意】：固定過程中甲醇能破壞肌動(dòng)蛋白，因此，固定液中避免接觸任何甲醇。的固定液是無甲醇的甲醛。

3.4 用1×PBS Buffer清洗細(xì)胞2-3次，室溫下30s/次。

3.5 用破膜緩沖液透化細(xì)胞，室溫處理5min。

3.6 用1×PBS Buffer清洗細(xì)胞2-3次，室溫下30s/次。

3.7 取100μl 現(xiàn)配的iFluor 647 Phalloidin染色工作液到每個(gè)孔內(nèi)，室溫避光孵育30-90min。

【注意】：若有需要，此時(shí)可加入即用型DAPI染色液或其他不同于iFluor 488熒光光譜的細(xì)胞核染色液。

3.8 用1×PBS Buffer清洗細(xì)胞2-3次，室溫下30s/次。

3.9 加抗熒光淬滅劑（如Fluoromount-G^TM，Cat# MM1401）到孔內(nèi)保護(hù)熒光。

3.10 熒光顯微鏡下觀察染色結(jié)果，選擇iFluor 647激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=650/665nm）。若做細(xì)胞核染色，選擇合適濾片，比如DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】 

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iFluor 647 Phalloidin 鬼筆環(huán)肽遠(yuǎn)紅 Actin熒光探針與細(xì)胞染色

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