AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

溫馨提示

見(jiàn)我司整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品標(biāo)簽

Matchmarker GAL4雙雜交系統(tǒng)；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品包裝

產(chǎn)品描述

AH109是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株，來(lái)源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ報(bào)告基因從而產(chǎn)生AH109。

AH109是MATa型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過(guò)接合（mating）操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或雙雜交文庫(kù)篩選和構(gòu)建。AH109-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標(biāo)志為Trp，用于表達(dá)DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標(biāo)志為Leu，用于表達(dá)AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四個(gè)報(bào)告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分別由三個(gè)*異源的Gal4反應(yīng)啟動(dòng)元件-G1，G2，M1調(diào)控，這三種啟動(dòng)子只有GAL4識(shí)別的17bp核心區(qū)相同，其余部分都不同。這一特征有效縮減假陽(yáng)性發(fā)生的概率。因?yàn)椋魏握T捕蛋白單獨(dú)結(jié)合引起假陽(yáng)性都需要識(shí)別3個(gè)不同序列，激活4個(gè)報(bào)告基因表達(dá)。

本品為經(jīng)特殊工藝制備的AH109酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS^-Gal1_TATA^-His3, MEL1GAL2_UAS^- Gal2_TATA^-Ade2, URA3::MEL1_UAS^-MEL1_TATA- lacZ

注意事項(xiàng)

1/在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

2/轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)?？上鄳?yīng)減少用于涂板的菌量。同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)?？蛇m當(dāng)增加質(zhì)粒的用量。

3/AH109對(duì)高溫敏感，zui適生長(zhǎng)溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化率都呈指數(shù)下降。

4/菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中的一種常見(jiàn)現(xiàn)象。當(dāng)酵母細(xì)胞在平板上培養(yǎng)幾天，將平板內(nèi)的腺嘌呤消耗殆盡，那時(shí)酵母試圖通過(guò)自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細(xì)胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。

5/酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營(yíng)養(yǎng)缺陷成分越多，生長(zhǎng)越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克隆；

6/為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受態(tài)細(xì)胞 克隆與表達(dá)分析

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