Y1HGold Chemically Competent Cell 

酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

溫馨提示

見(jiàn)我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產(chǎn)品專(zhuān)題。

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

GAL4-AbA酵母單雜交系統(tǒng)；Y1HGold；pAbAi；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal ；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；

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產(chǎn)品描述

酵母單雜交是在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)，不同于雙雜交用來(lái)研究蛋白-蛋白間的相互作用，單雜交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。

Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母單雜交系統(tǒng)用的菌株，MATα型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行文庫(kù)篩選。

Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，分別為pAbAi和pGADT7。前者篩選標(biāo)志為Ura，用于表達(dá)pBait-AbAi構(gòu)建子（通過(guò)將bait-DNA 單拷貝或串聯(lián)重復(fù)序列克隆到pAbAi載體所得）；后者篩選標(biāo)志為Leu，用于表達(dá)GAL4 AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)的工作原理在于：基因組整合有pBait-AbAi的酵母報(bào)告菌株，當(dāng)誘捕蛋白（prey）結(jié)合到誘餌序列（bait-DNA），GAL4 AD會(huì)激活AUR1-C報(bào)告基因的表達(dá)，這一表達(dá)使得細(xì)胞能夠在含篩選抗生素金擔(dān)子素（Aureobasidin A，AbA）的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。與傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比，AUR1-C（AbA^r）在很低濃度（100-200 ng/ml）下即可以有效殺死非抗性克隆，大大降低背景克隆生長(zhǎng)。這一優(yōu)勢(shì)也可降低酵母單雜交假陽(yáng)性發(fā)生的概率。

本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y1HGold酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y1HGold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重復(fù)一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
2. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
3. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH₂O重懸沉淀，離心30s棄上清。
4. 用50 µl ddH₂O重懸，涂板，放入恒溫培養(yǎng)箱29℃培養(yǎng)48-96 h。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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Y1HGold酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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