Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾膠原蛋白I

搜索關(guān)鍵詞：

Extracellular Matrix (ECM) 細(xì)胞外基質(zhì)；Gelatin 明膠；Collagen Type I 膠原蛋白I型；Poly-L-lysine 多聚L-賴氨酸；Fibronectin 纖連蛋白；Matrigel基質(zhì)膠； CAS：9007-34-5 ；

產(chǎn)品信息：

基本介紹：

膠原蛋白是結(jié)締組織和內(nèi)臟器官細(xì)胞外基質(zhì)的主要構(gòu)造成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布為廣泛。從遺傳和結(jié)構(gòu)上膠原蛋白分為許多類型。膠原蛋白I（Collagen, Type I）是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體，在37℃，中性pH下自發(fā)形成三螺旋骨架，是一種優(yōu)秀的細(xì)胞培養(yǎng)用基質(zhì)，廣泛用于肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脊神經(jīng)節(jié)、肌肉細(xì)胞、施萬細(xì)胞、胚肺細(xì)胞、上皮細(xì)胞和其他大量細(xì)胞系。還能用于研究細(xì)胞生長、分化、遷移以及發(fā)育過程中的組織形態(tài)發(fā)生。

懋康生物提供的鼠尾膠原蛋白I是根據(jù)Birkedal-Hansen方法，通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷suan氫二鈉沉淀等步驟制備?？捎糜诎患?xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)細(xì)胞表面粘附性，特別適合那些在普通培養(yǎng)器皿表面不易貼壁的細(xì)胞，比如成纖維細(xì)胞、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞。還可用于三維膠的制備，模擬真實(shí)的生長環(huán)境，使得細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。

本品為溶于6mM HAc的無菌溶液，濃度5mg/ml，每個(gè)批次產(chǎn)品皆通過細(xì)胞培養(yǎng)測試（包括三維空間培養(yǎng)）以保證質(zhì)量的可靠性。

注意事項(xiàng)

• 整個(gè)操作請于冰上進(jìn)行，因室溫鼠尾膠原I可迅速成膠，操作過程盡量保持低溫。

• 整個(gè)操作請?jiān)跓o菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長。

• 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被

組織培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度為1-5µg/cm²，起始濃度可首玄5µg/cm²。建議根據(jù)具體細(xì)胞類型來優(yōu)化。

1.1 6mM HAc稀釋液的制備

本品以溶于6mM HAc（=0.36g/L HAc）的無菌溶液形式提供，本身不溶于中性pH，建議用6mM HAc溶液做進(jìn)一步稀釋。

配制方法：取34.5µl 冰醋酸（17.4 M）加入100ml雙蒸水，充分混勻后即得到6mM HAc溶液，0.22µm濾膜過濾除菌后待用。

1.2 包被步驟

a，根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系以及優(yōu)化后的包被濃度來計(jì)算所需的膠原蛋白量，并加入相應(yīng)孔內(nèi)，確保膠原蛋白溶液*覆蓋表面。

• 以包被濃度為5µg/cm²，先用6mM HAc稀釋液將膠原蛋白（5mg/ml）稀釋到合適的中間濃度，如50µg/ml，

然后參考表1 不同培養(yǎng)皿內(nèi)膠原蛋白加量表 來加量到各孔內(nèi)；

• 以包被濃度為2µg/cm²，先用6mM HAc稀釋液將膠原蛋白（5mg/ml）稀釋到合適的中間濃度，如12µg/ml，然后參考表1 不同培養(yǎng)皿內(nèi)膠原蛋白加量表來加量到各孔內(nèi)；

表1 不同培養(yǎng)皿內(nèi)膠原蛋白加量表

b，室溫孵育1h，小心吸掉多余液體，用無菌PBS清洗3~4次后直接使用?；蛘呒油昴z原蛋白溶液后，在超凈臺內(nèi)開蓋過夜晾干。無菌條件下，包被好的器皿在4-25℃至少可保存3個(gè)月。

2. 三維膠原的制備

當(dāng)鼠尾膠原蛋白I使用濃度>1mg/ml，pH 7.0左右皆可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，建議成膠濃度為1-2 mg/ml。

由于本品是以溶于6mM HAc的無菌溶液形式提供，在成膠過程需先加入0.06倍體積的0.1M NaOH中和。

2.1 需要溶液準(zhǔn)備（無菌、預(yù)冷）

2.2 三維膠原制備（不含細(xì)胞）（以配制1ml，1mg/ml三維膠為例）：

2.3 三維膠原制備（含細(xì)胞）（以配制1ml，1mg/ml三維膠為例）：

相關(guān)產(chǎn)品：

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾膠原蛋白I 細(xì)胞培養(yǎng)

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