OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

產品標簽：

OverExpress C43(DE3)；C43(DE3) pLysS；BL21 (DE3)；OverExpress C41(DE3)；表達感受態(tài)細胞；毒性蛋白表達；pET表達載體；

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菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大腸桿菌（E. Coli）菌株，有效表達不同物種有機生物體包括細菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳動物來源的毒性蛋白。

OverExpress C43(DE3)菌株來源于OverExpress C41(DE3)菌株，通過篩選OverExpress C41(DE3)對另一個不同毒性蛋白的抗性菌株而獲得。OverExpress C41(DE3)來源于BL21(DE3)，此菌株含一個突變，能降低T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的水平，從而預防許多重組毒性蛋白過表達引起的細胞死亡。OverExpress C43(DE3)菌與OverExpress C41(DE3)相比，至少攜帶另一個不同突變，使其獲得更廣泛更高的毒性蛋白表達能力。

OverExpress C43(DE3)菌株含DE3區(qū)，表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），適用于靶基因克隆進入T7啟動子表達載體比如pET系列的蛋白生產。

OverExpress C43(DE3)菌株基因型：F^– ompT hsdS_B (rB^- mB^-) gal dcm (DE3)

產品描述

本品是大腸桿菌OverExpress C43(DE3)菌株經特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達5×10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

產品包裝

注意事項

1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉化效率。

2） hao在冰上融化感受態(tài)細胞，不可在冰上放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到低。

5） 產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6） 轉化高濃度的質?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

7） 誘導時，IPTG濃度范圍可選：0.1~2mM。

8） 為了得到足量的蛋白，需就加誘導時間、溫度、IPTG濃度進行優(yōu)化。

9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過夜。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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附錄I 蛋白誘導步驟（僅作參考）

1）從新鮮涂布平板上挑取一單克隆，轉移到含相應抗生素的5ml LB液體培養(yǎng)基內。

2）37℃搖菌培養(yǎng)過液。為了小化誘導前目的蛋白的小化表達，添加葡萄糖（終濃度為0.2% w/v）到生長培養(yǎng)基內。

3）將步驟2）中過夜培養(yǎng)的菌液吸取0.5ml接種到含相應抗生素的50ml LB液體培養(yǎng)基內。

4）37℃搖菌培養(yǎng)直至OD₆₀₀達到0.6~0.8。

5）加入IPTG使其終濃度為1mM。目的蛋白的加誘導時間可能在2~16h，依蛋白而異。

6）37℃培養(yǎng)3~4h。為了確定目的蛋白的加誘導時間，建議作一個時間周期優(yōu)化實驗，范圍從2~16h。

7）將培養(yǎng)物冰浴10min。4℃，5,000 x g離心10min收集菌株。

8）吸掉上清，將沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的溫度）。

IPTG母液（1M）配制

稱量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于適量去離子水，充分溶解后，調整終體積到10ml，并過濾除菌，即得到1M ITPG母液。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析