TG1 Chemically Competent Cell  

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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菌株描述

TG1來源于E. coli K-12菌株，是目前生長速度最快的克隆用大腸桿菌菌株。F′附加體上的lacIq的存在使其能嚴(yán)謹(jǐn)型調(diào)控表達(dá)含大腸桿菌啟動子（由lac操縱子序列控制，比如：T5，trc，tac）的載體。TG1是常用的噬菌體展示用菌株，也適用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建，lacIqZΔM15的存在使其可用于藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)。

TG1菌株基因型：F’ [traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] supE thi-1 Δ(mcrB-hsdSM)5(rK-mK-) Δ(lac-proAB)

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌TG1菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品包裝

保存與運(yùn)輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸，感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存。

2） 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化，不可在冰上放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

3） 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進(jìn)行。

4） 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最*-低。

5） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實(shí)驗(yàn)用。

6） 后續(xù)進(jìn)行陽性菌落的擴(kuò)繁和高純質(zhì)粒的獲取，推薦選用TB培養(yǎng)基（Terrific Broth），優(yōu)于LB或SOC。

7） TG1菌株不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，質(zhì)粒提取時，推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中的去蛋白液，為求去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。

8） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。原則是以在平板上能挑到單克隆菌落為宜。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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Chemically 大腸桿菌 生化試劑

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