SYTO 9 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO) 

(優(yōu)化版，配套MX4234 SYTO 9/PI試劑盒)

產(chǎn)品標(biāo)簽

SYTO 9；PI 碘化丙啶；Propidium Monoazide (PMA) 疊氮溴化丙錠；SYTO 9/PI Live/Dead Bacterial Double Stain Kit 活細(xì)菌/死細(xì)菌雙染試劑盒；活死細(xì)菌染色；

產(chǎn)品信息

溫馨提示1）：若需做雙染，可配合購買我司的碘化丙啶PI（MX4205-10MG，MX4205-1ML）。

溫馨提示2）：對于使用過我司試劑盒（貨號：MX4234），想再單獨購買SYTO 9（MX4234-A），請選擇 本貨號：MX4241-SYTO 9 （5mM），按照試劑盒內(nèi)推薦工作濃度或已優(yōu)化好的濃度使用即可。

溫馨提示3）：我司提供兩款染色級的SYTO 9，區(qū)別在于：一款是常規(guī)配方（MX4229-20UL，5mM in DMSO），一款是細(xì)菌染色優(yōu)化配方（MX4241-20UL，5mM in DMSO），初次購買用戶推薦MX4229，自行優(yōu)化染色條件；使用過我司試劑盒，想復(fù)購SYTO 9單組分的，推薦MX4241。

溫馨提示4）：若需做雙染，亦可直接購買我司的SYTO 9/PI Live/Dead Bacterial Double Stain Kit 活細(xì)菌/死細(xì)菌雙染試劑盒（MX4234-40T）。

產(chǎn)品描述

SYTO 9綠色熒光核酸染料（SYTO 9 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain），是一款優(yōu)秀的綠色熒光細(xì)胞核和染色體復(fù)染劑，能滲透進(jìn)入原核和真核細(xì)胞膜。SYTO 9高親和結(jié)合DNA（以及RNA），一旦結(jié)合后呈現(xiàn)明顯增強的熒光信號，最大激發(fā)和發(fā)射波長分別是483nm和503nm。SYTO 9極其適合用作細(xì)菌實驗的核復(fù)染劑，因其對革蘭氏陽性菌和陰性菌的活細(xì)胞和死細(xì)胞都能染色。SYTO 9常常與碘化丙啶（PI）聯(lián)合使用，用于活/死細(xì)菌染色。

本品以DMSO儲存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進(jìn)行簡單孵育即可。適用于哺乳動物細(xì)胞、革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌。

產(chǎn)品特性

1） 同義名：SYTO 9 Green dye；SYTO 9綠色熒光染料；

2） 外觀：橙色至暗紫紅色溶液

3） 熒光特征：E_X/E_m=485/498nm（與DNA結(jié)合）；E_X/E_m=486/501nm（與RNA結(jié)合）

圖1. SYTOX 9與核酸結(jié)合的光譜特征。A）與DNA結(jié)合的吸收光譜；B）與RNA結(jié)合的吸收光譜；C）與DNA或RNA結(jié)合后的熒光發(fā)射光譜。

4） 滲透性：細(xì)胞通透性

保存與運輸方法

保存：-20℃避光保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）熒光探針均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

應(yīng)用示例（來自文獻(xiàn)，僅作參考）

Ref 1）Yagüe P, Manteca A, Simon A, Diaz-Garcia ME, Sanchez J. New method for monitoring programmed cell death and differentiation in submerged Streptomyces cultures. Appl Environ Microbiol. 2010;76(10):3401-3404. doi:10.1128/AEM.00120-10

實驗?zāi)康模航⒁环N簡單和可靠得方法來監(jiān)測和定量鏈mei素發(fā)酵物的細(xì)胞死亡過程，使用活細(xì)胞染料SYTO 9和碘化丙啶PI。使用原理在于：SYTO 9是一種細(xì)胞膜滲透性的核酸染料，能夠標(biāo)記所有細(xì)胞：具膜完整性和受損的細(xì)胞膜。PI只能滲透進(jìn)入膜不完整的細(xì)菌。因此，在混合細(xì)菌群內(nèi)，具完整細(xì)胞膜的細(xì)菌呈綠色熒光，而破損膜結(jié)構(gòu)的細(xì)菌呈紅色；

Fig. S. coelicolor growth curve and antibiotic (actinorhodin and undecylprodigiosin) production in submerged cultures. Confocal microscope images of key developmental stages stained with SYTO 9 and PI are shown at the top: individual hyphae of the first compartmentalized mycelium (MI; arrows indicate septation), second multinucleated mycelium hyphae (MII), and the mycelial pellet (240 μm in diameter) undergoing PCD processes in the center (red). The transitory growth arrest phase coinciding with PCD is indicated. See text for details.

Ref 2）Robertson J, McGoverin C, Vanholsbeeck F and Swift S (2019) Optimisation of the Protocol for the LIVE/DEAD^® BacLight^TM Bacterial Viability Kit for Rapid Determination of Bacterial Load. Front. Microbiol. 10:801. doi: 10.3389/fmicb.2019.00801

實驗方法（SYTO 9+PI染色）：用棕色離心管稀釋SYTO 9和PI使其濃度分別為33.4和400 μM，置于冰上保存。分別加50 μl SYTO 9和50 μl PI工作液和/或0.85%生理鹽水（總體積為100μl）到0.9ml培養(yǎng)物內(nèi)，使得SYTO 9和PI 的濃度分別為1.67和20 μM。對于基本培養(yǎng)基的優(yōu)化實驗，每一組活細(xì)胞和死細(xì)胞懸液分別用SYTO 9, PI和SYTO 9+PI染色。

Fig. Live/dead spectrometry on live and dead E. coli suspensions in minimal media and saline. SYTO 9 intensity in minimal media (A), PI intensity in minimal media (B), proportion of live cells in minimal media derived from the kit ratio (C), % live cells in minimal media derived from the adjusted dye ratio (D), the proportion of live cells in saline derived from the kit ratio (E) and % live cells in saline derived from the adjusted dye ratio (F) for live and dead E. coli suspensions derived from integrating at three different wavelength ranges for each dye. An R²-value was generated from a linear regression analysis of data from each wavelength range. Data presented is the median with the range from six biological replicates.

染色流程

基于實驗室經(jīng)驗和發(fā)表方法，建議使用廣譜的染色濃度來開展使用，并且根據(jù)自身的細(xì)胞類型和實驗體系來優(yōu)化摸索出的工作濃度（見表2）。

使用塑料管來稀釋SYTO 9染料，由于稀釋后的染料會粘附到玻璃上?？偟膩碚f，用不含磷酸鹽的緩沖液來染色能得到zuihao的結(jié)果。塑料或玻璃器皿上殘留的去污劑也有可能影響許多細(xì)胞或有機(jī)體的真實染色，導(dǎo)致在含或不含細(xì)胞的溶液中都能看到發(fā)明亮熒光的材料。確保用溫和去污劑來清洗玻璃器皿，用熱自來水完quan沖洗干凈，最后用去離子水清洗數(shù)次。

①離心收集細(xì)胞，用生理鹽溶液或水重懸細(xì)胞。貼壁細(xì)胞（比如：哺乳動物細(xì)胞）可能在蓋玻片上原位染色。使用表2內(nèi)建議的工作濃度進(jìn)行染色。初次實驗，建議在建議濃度范圍內(nèi)做多個染料濃度，以確定能得到染色的工作濃度。需要注意：生長培養(yǎng)基、細(xì)胞密度、是否存在其它細(xì)胞、和其它因素都可能影響染色。

②染色的真核細(xì)胞通常顯示出彌散的細(xì)胞漿染色和細(xì)胞核染色，特別是經(jīng)?？吹矫髁恋暮藘?nèi)小體染色。由于此染料具細(xì)胞膜滲透性，且中性pH下帶凈正電荷，也有可能染線粒體。活酵母菌內(nèi)主要是線粒體染色。

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