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蝦堿性磷酸酶 (SAP)

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產(chǎn)品型號(hào)Applied Biosystems

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更新時(shí)間:2023-05-12 12:34:33瀏覽次數(shù):246次

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產(chǎn)品簡介

蝦堿性磷酸酶 (SAP)

詳細(xì)介紹

性能經(jīng)證實(shí) – 基準(zhǔn)磷酸酶
?在 65°C 下 15 分鐘內(nèi)可達(dá)到 99% 熱滅活
?顯著改善了低溫儲(chǔ)存的穩(wěn)定性(參見圖 1 和 2)
?具有較高的比活度 (參見圖 3)
?可去除 DNA、RNA、dNTP 和蛋白中的 5'-磷酸鹽
?從重組來源純化
?可直接添加到限制性內(nèi)切酶消化物中
?無需純化載體
?無需補(bǔ)充鋅或其他活性添加劑
?可直接在多種不同的緩沖液中使用
?在 DNA 測序或 SNP 分析之前,易于去除 PCR 產(chǎn)物中未摻入的 dNTP

USB Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) 是一種高比活度、不耐熱型重組堿性磷酸酶,最初從 Pandalus borealis(北極蝦)中分離出來。SAP 可用于多種分子生物學(xué)應(yīng)用,如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基團(tuán),用于后續(xù)的克隆和探針末端標(biāo)記。進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)時(shí),去磷酸化可防止線性質(zhì)粒 DNA 自連。SAP 也可以用來去除 PCR 反應(yīng)中的 dNTP,用于制備 DNA 測序和 SNP 分析模板

蝦堿性磷酸酶與小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase,以下簡稱 CIAP)的比活度大致相同,并且與 CIAP 一樣,在幾乎所有限制性內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液中均有活性。與 CIAP 不同的是,通過 65°C 15 分鐘的熱處理,蝦堿性磷酸酶可不可逆地滅活。

Shrimp Alkaline Phosphatase 特別適用于制備 PCR 產(chǎn)物,用于測序、SNP 分析或標(biāo)記方法相關(guān)的應(yīng)用。通常,PCR 反應(yīng)后剩余的過量 dNTP 會(huì)干擾隨后涉及 DNA 合成的酶反應(yīng)。只需一個(gè)簡單的步驟就可用 SAP 將 PCR 混合物中剩余的所有 dNTP 去磷酸化。

我們還提供了基準(zhǔn)重組磷酸酶。重組 SAP 消除了對(duì)動(dòng)物來源的依賴,具有較高的儲(chǔ)存穩(wěn)定性和批間一致性等額外優(yōu)點(diǎn),同時(shí)具有出色的酶活性,可 99% 熱滅活。

特性:
分子量:同源二聚體。測定氨基酸序列,得出單體分子量為 55 kDa。
pH 值:溶于緩沖液時(shí) pH 值 10.4,溶于 Tris 緩沖液時(shí) pH 值 8.0。
溫度:37°C
熱滅活:65°C 下 15 分鐘
抑制劑:10 mM DTT,0.1% β-ME
反應(yīng)條件:在 NaCl、KCl 中有活性。需要 Mg2+ 以達(dá)到活性。

來源:
重組

純度:
已檢測污染性核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶和核糖核酸酶。

儲(chǔ)存緩沖液:
25 mM Tris-HCl(pH 值 7.5)、1 mM MgCl2、50% 甘油。

測定條件:
反應(yīng)混合物含 100 mM (pH 值 10.4)、1 mM MgCl2、1 mM ZnCl2、10 mM 對(duì)硝基苯磷酸鹽和 0.001-0.1 單位的 Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)。監(jiān)測 405 nm 處的吸光度變化(3050 µL 反應(yīng)體積)。

單位定義:
一個(gè)單位是指 37°C 條件下于緩沖液(pH 值 10.4)中每分鐘催化 1 µmol 對(duì)硝基苯磷酸鹽水解所需的酶量。

濃度:
1 單位/µL

功能測試:
限制性內(nèi)切酶酶切質(zhì)粒的去磷酸化(5 – 20 pmol 5'-末端,0.1 -0.5 單位/pmol 5'-末端)。 與未處理的對(duì)照品相比,可將重新連接降至 <>

測序反應(yīng)或 SNP 分析前核苷酸去磷酸化和引物降解的方案:
請(qǐng)參閱 USB ExoSAP-IT 方案,PCR 純化的基準(zhǔn)。

購買 ExoSAP-IT 會(huì)提供使用 Exonuclease I 和 SAP 進(jìn)行 PCR 純化的方法的許可證。

經(jīng)功能測試的 10X SAP 反應(yīng)緩沖液(隨附,PN 70103):
200 mM Tris-HCl(pH 值 8.0)、100 mM MgCl2

經(jīng)功能測試的 SAP 稀釋緩沖液(1 mL,隨附,PN 72761):
50 mM Tris-HCl(pH 值 8.0)。

參考文獻(xiàn):
1.RUAN, C. C., SAMOLS, S. B. AND FULLER, C. W. (1990) Comments17, (), United States Biochemical Corporation, Cleveland, OH.
2.WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., V?LKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res.22, 4354-4355.
3.HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques17, 858-860.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.


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