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BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達(dá)載體試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)Invitrogen

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更新時(shí)間:2023-11-06 20:05:18瀏覽次數(shù):201次

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BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達(dá)載體試劑盒

詳細(xì)介紹

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達(dá)載體試劑盒兼具了傳統(tǒng) RNAi 載體的優(yōu)勢(shì)(穩(wěn)定表達(dá)和使用病毒遞送的能力)與組織特異性表達(dá)和同一轉(zhuǎn)錄本中多次靶標(biāo)基因敲低能力。包括在 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達(dá)載體試劑盒中的 pcDNA™6.2-GW/miR 載體設(shè)計(jì)用于表達(dá)人工 miRNA,其經(jīng)基因工程改造后與靶序列具有 99% 同源性,將導(dǎo)致靶標(biāo)切割。該載體包括來(lái)自內(nèi)源性 miRNA 的側(cè)翼和環(huán)序列,其指導(dǎo)從較長(zhǎng)的 Pol II 轉(zhuǎn)錄本(miRNA 前體)中切除基因工程改造 miRNA。使用 Invitrogen 優(yōu)質(zhì) BLOCK-iT™ RNAi Designer,70% 以上的構(gòu)建體產(chǎn)生超過(guò) 70% 的敲低?;蚬こ谈脑?miRNA 的 Pol II 表達(dá)可實(shí)現(xiàn):
o CMV 立即早期啟動(dòng)子的強(qiáng)表達(dá),可選擇通過(guò) MultiSite Gateway™ 重組使用組織特異性或其他調(diào)節(jié)啟動(dòng)子
o 與許多用于基因表達(dá)的 Invitrogen Gateway™ 目的 (DEST) 載體兼容;包括用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)分裂、非分裂和原代細(xì)胞類(lèi)型的慢病毒載體、用于單位點(diǎn)染色體整合的 Flp-In™ 系統(tǒng)以及替代報(bào)告基因融合構(gòu)建體
o 在同一轉(zhuǎn)錄本上表達(dá)一個(gè)以上的基因工程改造 miRNA,允許同時(shí)敲低多個(gè)基因并產(chǎn)生合成表型
工作原理
對(duì)于 miR RNAi 序列的高水平表達(dá),pcDNA™6.2-GW/miR 載體包括 CMV 啟動(dòng)子(圖1)。只需在免費(fèi)的在線 BLOCK-iT™ RNAi Designer 中輸入 RefSeq 登錄號(hào)或核苷酸序列,該軟件即可設(shè)計(jì)出與目標(biāo)靶標(biāo)具有 99% 同源性的優(yōu)化 miRNA。使用快速連接方案將 miRNA 克隆至載體中并進(jìn)行轉(zhuǎn)染,以立即表達(dá) miRNA。表達(dá)的 miRNA 在細(xì)胞核中通過(guò)內(nèi)源性細(xì)胞機(jī)制(包括 Drosha)加工,然后轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)中,在細(xì)胞質(zhì)中通過(guò) Dicer 進(jìn)行進(jìn)一步加工(圖2)。然后將加工的 miRNA 摻入 RISC 中,在后者中其功能類(lèi)似于 siRNA,并可導(dǎo)致 mRNA 靶標(biāo)切割。
對(duì)于多種表達(dá)選項(xiàng),miRNA 盒(miR 側(cè)翼區(qū)和與目標(biāo)靶標(biāo)同源的 miRNA)可輕松地轉(zhuǎn)移至多種 DEST 載體中。這通過(guò) Gateway™ 重組反應(yīng)發(fā)生,在該反應(yīng)中,將 miRNA 盒轉(zhuǎn)移至 pDONR™ 載體中(BP 反應(yīng)),然后轉(zhuǎn)移至 DEST 載體中(LR 反應(yīng))。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.


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