ELISA試劑盒雙抗體夾心法原理：固相載體上包被抗體，再加入待測(cè)抗原（可以是血清或者其它樣本），洗板（洗掉非特異性吸附），再加入酶標(biāo)抗體，再洗板（洗掉非特異性吸附），再加底物顯色。這里有幾點(diǎn)需要注意：①抗原是大分子抗原，具有2個(gè)以上的抗原表位；②包被抗體和酶標(biāo)記的抗體都是針對(duì)抗原的特異性抗體，只不過它們分別針對(duì)的是不同抗原表位，經(jīng)常被稱作一抗和二抗；③酶是催化底物顯色的，起到一個(gè)信號(hào)放大作用。
ELISA試劑盒操作步驟如下：
1） 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2） 加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。
洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3） 加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合
的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4） ELISA試劑盒加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。