好看日韩在线视频免费,日本不卡一区二区三区,三级a全过程在线观看,亚洲精品国产9999久久久久

江蘇菲亞生物科技有限公司

細胞裂解

時間:2017-4-24閱讀:241
分享:

    裂解方法包括化學裂解、裂解和機械裂解。化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會很少使DNA 斷裂。這兩種方法(包括SDS 和*處理等)提取純化DNA中常用的方法。機械裂解可以更均一的裂解細胞,同化學裂解相比,機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞,但也會造成DNA 的斷裂。

一、機械裂解法主要有以下兩種:

1、熱休克(Thermal shock),既反復凍溶法,是一種常用的機械裂解方式比,通常由冷凍和解凍兩部分組成(freezing and thawing)。原理:由于細胞內(nèi)冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結(jié)構(gòu)破碎。冷凍通常在液氮或-20°C冰上進行,解凍可以在3750、65 100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和,但是很有效,有資料表明用熱休克和*與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。

2、超聲波處理(Ultrasonication)既利用超聲加熱的方法,把細胞破碎。但這種處理會導致DNA 的斷裂,所以加熱不宜過劇烈,要設(shè)定好超聲時間和間隙時間,一般超聲時間不超過5秒,間隙時間大于超聲時間,這些都有利于保護酶的活性。bead-beating 也是常用的機械處理方式,有報道指出bead-beating 比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好 雖然DNA產(chǎn)量較高,但通常得到的DNA片段較小。

二、  化學裂解和酶裂解法(在提核酸時聯(lián)合使用)

    主要是裂解液處理法,細胞裂解液的主要目的有以下幾種:(1)利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層,破裂細胞;(2)溶解蛋白;(3)蛋白變性使其穩(wěn)定;(4)抑制蛋白酶活性。

    主要根據(jù)不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取RNADNA時,我們主要是要充分裂解細胞,得到更多的核酸;如果我們的目的是蛋白,那要根據(jù)蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液,在提取蛋白后,再根據(jù)實驗需要復性蛋白等。以下是中常用試劑和其作用:50 mM Tris-HCl pH 7.4(緩沖體系),150 mM NaCl(等滲體系),1 mM PMSF (強大的蛋白酶抑制劑),1 mM EDTA(變性劑和穩(wěn)定劑),5 µg/ml Aprotinin(蛋白酶抑制劑),5 µg/ml Leupeptin蛋白酶抑制劑),1% Triton x-100(破壞細胞),1% Sodium deoxycholate(中度變性劑和蛋白溶解劑),0.1% SDS(強變性劑和蛋白溶解劑)。7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解),蛋白酶K等。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責,環(huán)保在線對此不承擔任何保證責任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產(chǎn)品前務必確認供應商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

在線留言
人人摸人 人干人人草操| 老司机午夜精品视频无码| 黄色视频网在线观看| 精品日韩欧美精品日韩| 成人黄色精品久久app| 精品一区二区视频在线观看| 日韩在线视频不卡一区二区三区| 精品精品国产一区二区性色av| 最新黄色A级一短片| 欧美一区二区三区身体| 97青青草免费在线观看| 美女主播被操流水| 操老骚逼三级黄视频| 黑人巨茎和中国美女视频| 国产黄片在线免费看| 国产成人精品区在线观看| 中文字幕乱码一区二区三区麻豆| 日韩精品无码一区二区三区不卡| 鸡巴插骚逼视频欧美风格| 欧美大鸡巴插入骚b| 国产蜜月精品高清一区二区三区| 一区亚洲免费二区| 伊人网在线视频观看| 国产午夜精品美女视频露脸| 亚洲色欲久久久久综合网| 美女大骚逼幸福遍穴| 国产乱理伦片在线观看夜| 看人妻仑乱A级毛片| 想被操在线啊啊啊啊| 搞段B片黄色全免费看看| 欧亚洲嫩模精品一区三区| 日本一区二区高清免费不卡| 联系附近成熟妇女| 欲色福利网免费在线播放| 男人插女人视频软件| 国内不卡的中文字幕一区| 免费看女人操逼玩| 瓯美在线免费视频笫一区第二区| 欧美精品第一区二区三区| 大黑屌后入骚妇屁股| 亚洲av 又黄又爽十大|