細(xì)胞：LNCaP細(xì)胞
中文名稱：人前列腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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烷氧自由基氫遷移反應(yīng)可以使特定位置的惰性碳?xì)滏I發(fā)生選擇性斷裂，從而實(shí)現(xiàn)區(qū)域與化學(xué)選擇性的碳?xì)涔倌芑磻?yīng)。
然而烷氧自由基發(fā)生氫遷移反應(yīng)后主要生成氫化產(chǎn)物、氧化環(huán)化產(chǎn)物或碳雜鍵產(chǎn)物，無(wú)法高效地進(jìn)行分子間的碳碳成鍵反應(yīng)。該反應(yīng)使用穩(wěn)定的N-烷氧酞酰亞胺作為烷氧自由基前體，適用于活化及非活化C(sp3)-H碳?xì)滏I的官能化。
由于具有優(yōu)秀的區(qū)域和化學(xué)選擇性，并且對(duì)雜環(huán)及炔烴等官能團(tuán)具有很好的兼容性；該反應(yīng)可以高選擇性地進(jìn)行復(fù)雜分子膽固_醇的克級(jí)別后期修飾。同時(shí)該反應(yīng)在水相中也可以順利進(jìn)行，為進(jìn)一步發(fā)展生物相容反應(yīng)提供了有利條件。
醇是理想的烷氧自由基前體，然而由醇通過(guò)均裂的方法生成烷氧自由基在熱力學(xué)上需要較高的能量；在合成上比較困難，目前通常在過(guò)渡金屬活化和較強(qiáng)的氧化條件下將醇氧化產(chǎn)生烷氧自由基。
烷氧自由基導(dǎo)向的β斷裂可以選擇性地實(shí)現(xiàn)惰性C(sp3)-C(sp3)鍵切斷，進(jìn)而產(chǎn)生酮及烷基自由基。然而目前烷氧自由基導(dǎo)向的β斷裂主要適用于張力環(huán)醇的研究，線性醇的碳碳鍵切斷十分困難。
該方法可以實(shí)現(xiàn)張力環(huán)醇和線性醇的碳碳鍵切斷及炔基化和烯基化反應(yīng)；具有優(yōu)秀的區(qū)域和化學(xué)選擇性，可以應(yīng)用于復(fù)雜分子石膽酸及膽固_醇的后期修飾。
