細(xì)胞:A375細(xì)胞
中文名稱:人惡性黑色素瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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顯微鏡可三維觀察癌癥活體細(xì)胞
在關(guān)于哪些因素可以改變細(xì)胞與周圍環(huán)境相互作用的研究中,研究人員發(fā)明了一種顯微鏡,可用于三維觀察活體癌癥(cancer)細(xì)胞,而且每個(gè)方向像素都很高。
在此之前,高像素活體成像一直用玻璃片上培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行,這種方式會(huì)讓樣本變平。
由于活體細(xì)胞對(duì)其周圍環(huán)境高度敏感,因此用膠原質(zhì)代替玻璃片的新微觀方法有助于揭示更加自然的行為。
這種叫作微環(huán)境選擇性平面照明顯微鏡(meSPIM)的技術(shù)利用又長(zhǎng)又細(xì)的激光束在樣本中產(chǎn)生熒光,使其發(fā)光,它可以揭示小至300納米的細(xì)節(jié)。
同時(shí)在模擬真實(shí)組織的樣本中又可以保持較廣泛的視野。這可以讓研究人員觀察復(fù)雜的過程,如在癌癥(cancer)和非癌癥(cancer)組織中的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。
在此過程中,研究人員發(fā)現(xiàn)黑色素瘤(melanoma)細(xì)胞在膠原質(zhì)中的表現(xiàn)和玻璃片下的表現(xiàn)不同,會(huì)形成更多被稱為“皰疹”的圓形凸起。
研究人員可以測(cè)量這些皰疹的大小和形狀,并利用量化顯微鏡觀察目標(biāo)的數(shù)量,并計(jì)算特殊蛋白的分布。這些圖像可以幫助研究人員了解癌癥(cancer)細(xì)胞如何入侵其他組織。