細(xì)胞：Capan-1細(xì)胞
中文名稱：人胰腺癌細(xì)胞
生長特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：IMDM+20%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；)
Ser294的磷酸化對(duì)PI4KIIIβ功能有什么作用？
磷酸化位點(diǎn)的突變使得PI4KIIIβ的脂激酶活性降低了60%。另外，與激酶失活的PKD突變體的顯性失活效應(yīng)相統(tǒng)一的，過量表達(dá)激酶死亡PKD1降低了PI4KIIIβ的脂激酶活性。
突變也降低了熒光標(biāo)記的分泌型蛋白質(zhì)從TGN到細(xì)胞表面的運(yùn)輸效率。PI4KIII的過量表達(dá)增加了標(biāo)記蛋白到達(dá)細(xì)胞表面的數(shù)量。
總結(jié)起來，這些結(jié)果表明蛋白激酶和脂激酶對(duì)于分泌型蛋白運(yùn)輸過程都非常重要。
科研人員認(rèn)為，PKD在TGN的功能就像是“瓶頸”一樣進(jìn)行調(diào)控：通過促使參與載體囊泡形成的蛋白質(zhì)磷酸化，來控制分泌型分子的運(yùn)輸。
PI4KIIIβ是這些底物中的一員，通過PKD介導(dǎo)的磷酸化增強(qiáng)了它的脂激酶活性。這個(gè)過程進(jìn)而增加了TGN膜中的PI(4)P數(shù)量。
因?yàn)镻I(4)P數(shù)量和膜結(jié)合的ADP-核糖基化因子，被認(rèn)為是介導(dǎo)載體囊泡形成的重要成員。接下來，對(duì)于研究者們的挑戰(zhàn)將會(huì)是闡明載體囊泡形成的精確機(jī)制。
