細(xì)胞:JF1細(xì)胞
中文名稱:大鼠肉瘤細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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與胚胎干細(xì)胞相比,成體干細(xì)胞具有許多優(yōu)勢:
胚胎干細(xì)胞具有全能性和可以建系傳代等優(yōu)點(diǎn),理論應(yīng)用前景廣闊。但實(shí)際上由于每個個體的主要組織相容性復(fù)合體(MHC)不同,同種異體胚胎干細(xì)胞及其分化組織細(xì)胞用于臨床會引起免疫排斥,因此基于胚胎干細(xì)胞的治療方案要求對患者進(jìn)行長期免疫抑制劑治療或?qū)⒒颊叩脑煅到y(tǒng)和外來細(xì)胞形成嵌合體。
研究證實(shí):人胚胎干細(xì)胞能誘導(dǎo)分化成為造血細(xì)胞,但小鼠胚胎干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)表明:
來源于胚胎干細(xì)胞的造血細(xì)胞在體內(nèi)無法重建造血機(jī)制,因而限制了臨床應(yīng)用。為了解決免疫排斥的問題,研究人員探索將患者的體細(xì)胞核移植到去核的健康供體卵細(xì)胞中,在體外克隆并隨后發(fā)育分化產(chǎn)生攜帶患者自己MHC的胚胎干細(xì)胞。
這些胚胎干細(xì)胞及其衍生組織移植后不會產(chǎn)生免疫排斥,因此可以用于患者病變組織及其功能的重建,這就是治療性克隆。
但一些研究觀察:胚胎干細(xì)胞發(fā)育分化過程中具有極_高的非整倍體發(fā)生率,克隆動物的基因在構(gòu)成沒有缺陷的情況下,也不能像正常動物基因一樣準(zhǔn)確表達(dá)出來。
BGC-823細(xì)胞 BGC823細(xì)胞胃腺癌細(xì)胞種屬:人
BV2細(xì)胞 膠質(zhì)細(xì)胞種屬:小鼠
CV-1細(xì)胞 CV1細(xì)胞 腎細(xì)胞 種屬:猴
正是這個原因,造成現(xiàn)在98%的動物克隆實(shí)驗(yàn)失敗,而順利降生的克隆動物也經(jīng)常出現(xiàn)體重超重等異常。研究還發(fā)現(xiàn),利用目前的克隆技術(shù)取患者體細(xì)胞核的細(xì)胞克隆培育出來的新組織一樣會存在缺陷,這項(xiàng)技術(shù)還有待完善、成熟。
體細(xì)胞克隆所需的卵細(xì)胞難以獲得,成體干細(xì)胞則可從患者自身獲得,而不存在組織相容性的問題,治療時可避免長期應(yīng)用免疫抑制劑對患者的傷害。此外,少量的骨髓切除治療有助于形成部分造血嵌合,可使異體成體干細(xì)胞的治療成為可能。