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由于質(zhì)??梢詮?fù)制擴增,相比起化學(xué)合成來說,這就能夠顯著降低制備siRNA的成本。因為質(zhì)粒的價錢大約是3000多人民幣,還不到化學(xué)合成1條21nt的RNA價格的一半,但是就可以自行制備siRNA而不受數(shù)量的限制。
在這里為大家介紹幾種不同的siRNA合成質(zhì)粒,但是大家要注意的是這里介紹的siRNA質(zhì)粒是不同于體外轉(zhuǎn)錄合成RNA的質(zhì)粒,因為這里制備的是用于哺乳動物細(xì)胞實驗的siRNA,而不是長鏈的RNA(長鏈的dsRNA不適宜用在哺乳動物細(xì)胞
因為會引發(fā)非特異抑制pSilencer siRNA 表達載體系列是用于在培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞中表達siRNA的一系列載體。
在載體上包含有RNA聚和酶III (Pol III)啟動子,氨芐抗性基因和大腸桿菌復(fù)制子,只要將編碼一小段對應(yīng)目的基因特異序列的、其RNA能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)(就是回文結(jié)構(gòu))的DNA序列插入載體中Pol III 啟動子的下游,轉(zhuǎn)入哺乳動物細(xì)胞,載體就能表達出發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNA,這種RNA很快在細(xì)胞中加工成為siRNA。
這些表達載體已經(jīng)成功的在Hela細(xì)胞中抑制了包括Cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在內(nèi)的多個基因的表達。實驗表明:能夠被化學(xué)合成或者體外合成的siRNAs抑制的基因同樣可以被表達相同序列的載體生成的siRNAs抑制。
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