上海研盟生物提供的“人*(cAMP)ELISA試劑盒實(shí)用技術(shù)”，進(jìn)口ELISA抗體對(duì)組裝，保證實(shí)驗(yàn)效果，可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，點(diǎn)擊此處查看
人*（cAMP）試劑盒 （酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法） 使用說(shuō)明書(shū)
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣 本中人*（cAMP）的含量。 ?
有效期：6個(gè)月 ?
保存條件：2-8℃
[實(shí)驗(yàn)原理] 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人* （cAMP）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并 *洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人*（cAMP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波 長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
[樣本處理及要求] 1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)， 或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘， 或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃ 或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
[需要而未提供的試劑和器材]
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
[試劑盒組成] 名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注 微孔酶標(biāo)板 8 孔×12 條 8 孔×6 條 無(wú) 標(biāo)準(zhǔn)品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無(wú) * 6mL 3mL 無(wú) 檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú) 20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 底物 A 6mL 3mL 無(wú) 底物 B 6mL 3mL 無(wú) 終止液 6mL 3mL 無(wú) 封板膜 2 張 2 張 無(wú) 說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份 無(wú) 自封袋 1 個(gè) 1 個(gè) 無(wú) 空白稀釋板 1 塊 1 塊 選配 橡膠手套 2 副 2 副 選配
備注： 1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：24、12、6、3、1.5、0 nmol/L 2. 經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用*將標(biāo)本 進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[注意事項(xiàng)]
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室 溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中 不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞 試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
[試劑準(zhǔn)備] 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
[操作步驟]
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本 50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙 上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算] 以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。
[試劑盒性能]
1. 檢測(cè)范圍：0.75 nmol/L – 24 nmol/L。
2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于 0.1 nmol/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。
[說(shuō)明]
1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分 析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
2. zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng) 務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別，如：檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù) 試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。
4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有 嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到的檢測(cè)結(jié)果。
5. 本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使 用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
6. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
7. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí) 間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
8. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè) 抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出。
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