上海研盟生物提供的“雞孕激素/孕酮（PROG）ELISA試劑盒技術(shù)說明”，進(jìn)口ELISA抗體對(duì)組裝，保證實(shí)驗(yàn)效果，可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，點(diǎn)擊此處查看
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雞孕激素/孕酮（PROG）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍：
100 pmol/L -2500 pmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中孕激素/孕酮（PROG）含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞孕激素/孕酮（PROG）水平。用純化的雞孕激 素/孕酮（PROG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕激素/ 孕酮（PROG） ，再與 HRP 標(biāo)記的孕激素/孕酮（PROG）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗 體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在 酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕激素/孕酮（PROG）呈正相關(guān)。用 酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞孕激素/孕酮 （PROG）濃度。
操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。 2400 pmol/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1200 pmol/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 600 pmol/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 300 pmol/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150 pmol/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl， 然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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