（一）多克隆抗體的概念
    抗原刺激機體，產(chǎn)生免疫學反應，由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組球蛋白，這就是免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（Monclone antibody）。由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體；除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一類抗原決定簇，也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。
（二）免疫動物
    供免疫用的動物主要是哺乳動物和禽類，常選擇家兔、綿羊、山羊、馬、騾和豚鼠及小鼠等。動物的選擇常根據(jù)抗體的用途和量來決定，也與抗原的性質有關。如要獲得大量的抗體，多采用大動物；如要是獲得直接標記診斷的抗體，則直接采用本動物；如要獲得間接的標記診斷用抗體，則必須用異源動物制備抗體；如果難以獲得的抗原，且抗體的需要量少，則可以采用純系小鼠制備；一般實驗室采用的抗體，多用兔和羊制備。
    免疫用的動物選擇適齡的健康雄性動物，雌性動物特別是妊chen動物用于制備免疫抗體則非常不合適，有時甚至不產(chǎn)生抗體。由于對免疫應答的個別差異，免疫時應同時選用數(shù)只動物進行免疫。
    抗原是多種多樣的，而且千差萬別。就其化學成分而言，有蛋白質抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清，是選用蛋白質抗原，如要制備用于篩選細菌表達的cDNA文庫或免疫印跡的抗血清，選用可降解的蛋白質抗原。不同的抗原，其免疫原性的強弱均不相同，這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學活性基團、立體結構、物理形狀和彌散速度等。
    抗原的免疫劑量是依照給予動物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過低，不能引起足夠強的免疫刺激，免疫劑量過多，有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內(nèi)，抗體的效價是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言，小鼠的免疫劑量為50μg～400μg/次，大鼠為100μg～1 000μg／次，兔為200μg～1 000μg/次。加強計量為劑量的1／5～2／5。
    免疫劑量與注射途徑有關，一般而言，靜脈注射劑量大于皮下注射，而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大，也可采用淋巴結內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小，對家兔而言，采用弗氏*佐劑，則需注射0.5mg～1mg/kg./次，如采用弗氏不*佐劑則注射劑量應大10倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得價的抗血清，宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者，可少量多次。免疫周期短者，應大量少次。
    兩次注射的間隔時間應長短適宜,太短起不到再次反應的效果，太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時間應為5~7天，加佐劑者應為2周左右。
    注射的Ig純度高，則一般不易引起過敏反應，如注射血清，即使是少量，在再次免疫時，極易引起過敏反應，所以一定要采取措施。
（三）佐劑的應用
    對可溶性抗原而言，為了增強其免疫原性或改變免疫反應的類型、節(jié)約抗原等目的，常采用加佐劑的方法以刺激機體產(chǎn)生較強的免疫應答。
1．佐劑的類型 目前實踐中常應用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質體和石蠟油等。也有采用結合桿菌等分枝桿菌、白喉桿菌以及細小棒狀桿菌等。
⑴ 弗氏不*佐劑（incomplete Freund's adjuvant,IFA）
羊毛脂 1 份
石蠟油 5 份
混合，高壓滅菌后保存。用時加熱融化，冷卻至50℃左右，加抗原進行乳化處理。
⑵ 弗氏*佐劑（complete Freund's adjuvant,CFA）
弗氏不*佐劑 10ml
卡介苗 10mg～200mg
卡介苗可100℃10min滅活處理。
    初次免疫時，用弗氏*佐劑，以刺激機體產(chǎn)生較強的免疫反應。再次免疫時，一般不用*佐劑，而采用弗氏不*佐劑。但在研究分枝桿菌及相關抗原時，一般不用弗氏*佐劑，以免卡介苗的干擾。
⑶ 脂質體：是人工制備的類脂質的小球體，由一個或多個酷似細胞膜的類脂雙分子層組成，這種結構使其能夠攜帶各種親水的、疏水的和兩性物質，他們被包裹在脂質體內(nèi)部的水相中，或插入類脂雙分子層或吸附、聯(lián)接在脂質體的表面，起到明顯的免疫增強作用。
⑷ 油佐劑 ：采用植物油和礦物油均可，包括豆油、花生油、油菜油等。目前應用zui廣的礦物油。
10號白油(石蠟油) 100ml
硬脂酸鋁 2g
司本80 6ml
混合加熱融化，分裝。用時按下列配方進行乳化。
油相 3份
水相（加4%吐溫－80） 1份
先把油相攪拌起來，然后緩慢加入水相乳化。司本是油分散劑，吐溫是水分散劑，均有利于乳化。
2．乳化 將抗原與佐劑混合的過程稱為乳化。乳化的方法很多，可采用研缽乳化；可直接在旋渦振蕩器上乳化；可用組織搗碎器乳化。少量時，特別是弗氏佐劑與抗原乳化時，常采用注射器乳化，用兩個注射器，一個吸入抗原液，一個吸入佐劑，兩注射器頭以膠管連接，注意一定扎緊，然后來回抽吸。當大量乳化時，可采用膠體磨進行。
    乳化好的標志是取一滴乳化劑滴入水中呈現(xiàn)球形而不分散。如出現(xiàn)平展擴散即為未乳化好。乳化過的物質放置一段時間（在保存期內(nèi)）出現(xiàn)油水分層也是未乳化好的表現(xiàn)。
    根據(jù)抗原的性質、免疫原性和動物的免疫反應性來決定免疫途徑、免疫次數(shù)和間隔時間等。
    免疫途徑包括皮下注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射、靜脈注射、腹腔注射以及淋巴結內(nèi)注射等。抗原量少，則一般多采用加佐劑，淋巴結內(nèi)或淋巴結周圍、或足掌、或皮內(nèi)、皮下多點注射，如抗原量多，則可采用皮下、肌肉、以至靜脈注射。
    注射間隔時間 帶佐劑的皮內(nèi)、皮下注射，一般為間隔2～4周免疫一次。不帶佐劑的皮下或肌肉注射，一般為1～2周間隔時間；肌肉或靜脈免疫的，可5天左右的間隔時間。
可以把各種注射途徑聯(lián)合起來應用，zui終以達到效價要求為目的。
（四）抗體的鑒定
    1.抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較價。不同的抗原制備的抗體，要求的效價不一。鑒定效價的方法很多，包括有試管凝集反應、瓊脂擴散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價，一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
    2.抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力?？贵w的特異性高，它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線，計算各自的結合率，求出各自在IC50時的濃度，并按下列公式計算交叉反應率。
    如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質的IC50濃度幾乎是無窮大時，表示這一抗血清與其他抗原物質的交叉反應率近似為0，即該血清的特異性較好。
    3.抗體的親和力 是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在108～1010/mol，也有多達1014/mol?？贵w親和力的測定對抗體的篩選，確定抗體的用途，驗證抗體的均一性等均有重要意義。
（五）抗血清的凍存
    抗血清收獲后，加1/萬硫柳汞或1/萬的疊氮鈉防腐，或加入等量的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下的低溫保存，數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價無明顯變化。注意避免反復凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存。