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ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因

閱讀:198發(fā)布時(shí)間:2017-9-20

  ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因,孫老師在金益柏購買了elisa試劑盒,因?yàn)閯偨佑|elisa實(shí)驗(yàn),還是屬于新手,研究大鼠干擾素相關(guān)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn),做完大鼠γ干擾素ELISA實(shí)驗(yàn)后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時(shí)候梯度還算明顯,但是顯色比較淺,隨著時(shí)間延長(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測得的值梯度就沒有了。


  ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因:


  1、剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。


  2、酶濃度太高,導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的


  3、包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng),或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠,


  4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。


  5、建議:包被、酶標(biāo)重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍


  6、有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。


  7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。


  8、酶是自己標(biāo)的這種情況的,HRP比例不要太高。


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