以免疫學(xué)理論為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。它已廣泛應(yīng)用于各種傳染病、免疫性疾病、腫瘤的診斷與防治。

體液免疫測定法

　　某些細(xì)菌抗原與對應(yīng)抗體在體內(nèi)結(jié)合時(shí)，可出現(xiàn)殺菌、溶菌等現(xiàn)象。抗原與對應(yīng)抗體在體外結(jié)合時(shí)，由于抗原的物理性狀和參加物質(zhì)（電解質(zhì)、補(bǔ)體等）的不同，可出現(xiàn)凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。由于抗體存在于血清等體液中，一般都采用血清進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)（又稱血清反應(yīng)）試驗(yàn)。
　　凝集反應(yīng) 　顆粒性抗原（如病原微生物或紅細(xì)胞等）與特異性抗體結(jié)合時(shí)所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。根據(jù)反應(yīng)中附加因素的不同，可分為下述幾種形式：
　　直接凝集反應(yīng) 　在微生物或紅細(xì)胞懸液中，加入含有特異性抗體的血清，在一定濃度的電解質(zhì)（如生理鹽水）參與下，微生物或紅細(xì)胞凝集成團(tuán)。①細(xì)菌凝集反應(yīng)：細(xì)菌與相應(yīng)抗體的凝集現(xiàn)象。例如傷寒桿菌只能被傷寒桿菌抗體凝集。用已知的細(xì)菌懸液檢查病人血清中抗體的效價(jià)，或用已知的免疫血清鑒定從病人標(biāo)本中分離的細(xì)菌；②紅細(xì)胞凝集反應(yīng)：同種中某些個(gè)體的紅細(xì)胞與其他個(gè)體血清中的抗體發(fā)生的特異性凝集反應(yīng)。即不同血型紅細(xì)胞的同種凝集，也叫血凝反應(yīng)。可用于血型檢定和交叉配血試驗(yàn)，以選擇合適的供應(yīng)者。如果病毒顆粒（如流感病毒）上有血凝素，它與某些脊椎動(dòng)物（豚鼠、雞、猴等）的紅細(xì)胞表面上的受體結(jié)合，就會(huì)出現(xiàn)非特異性的凝集。這種病毒血凝現(xiàn)象可被特異性抗體抑制，產(chǎn)生血凝抑制反應(yīng)。用這種反應(yīng)鑒定病毒型和株以及測定特異性抗體。
　　抗球蛋白試驗(yàn) 　一種極為敏感的檢查不*抗體的方法。例如對紅細(xì)胞的不*抗體只能與含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞發(fā)生結(jié)合，但不發(fā)生凝集。不*抗體是球蛋白，也有抗原性，能與其對應(yīng)抗體結(jié)合。當(dāng)加入抗該種球蛋白的抗體時(shí)，由于球蛋白與抗球蛋白抗體的特異性結(jié)合而出現(xiàn)凝集反應(yīng)，顯示出不*抗體的存在。
　　間接凝集反應(yīng) 　將小分子抗原吸附在無關(guān)顆粒（如紅細(xì)胞、乳膠顆粒、活性炭等）上，再與抗原的對應(yīng)抗體作用而出現(xiàn)的凝集反應(yīng)。若將抗體預(yù)先吸附在無關(guān)顆粒上，再與對應(yīng)抗原作用出現(xiàn)凝集，這叫做反相間接凝集反應(yīng)。若是用紅細(xì)胞作為載體顆粒，稱為間接血凝反應(yīng)。若是用乳膠作為載體顆粒，則稱為間接乳膠凝集反應(yīng)。①間接血凝反應(yīng)：將抗原成分吸附或結(jié)合在紅細(xì)胞上，然后加入相應(yīng)的抗體，由于抗體與抗原的特異結(jié)合，而把結(jié)合抗原的紅細(xì)胞間接（被動(dòng)）凝集起來,這時(shí),紅細(xì)胞起到載體的作用，能使微量可溶性抗原與抗體結(jié)合，成為肉眼可見的血凝現(xiàn)象。間接血凝反應(yīng)是檢測抗體的敏感方法。例如，可用腦膜炎球菌、沙門氏菌的抗原成分、乙型肝炎表面抗原與紅細(xì)胞結(jié)合以檢測病人血清中相應(yīng)的抗體。若將特異性抗體結(jié)合于紅細(xì)胞上，通過血凝反應(yīng)檢測相應(yīng)的抗原，則稱為反向間接血凝反應(yīng)。這是檢測微量抗原（如毒素、細(xì)菌成分）和早期快速診斷傳染病的敏感方法，現(xiàn)已用于診斷腦膜炎、布魯斯氏菌病、出血熱、病毒性肝炎等。此外，還可用于檢測人和動(dòng)物的組織抗原和激素抗原（圖1）；②間接乳膠凝集反應(yīng)：用無活性乳膠顆粒（如聚苯乙烯乳膠）代替間接血凝反應(yīng)中所用的紅細(xì)胞作為載體，將抗原成分（或抗體）包被其表面，形成大顆粒型試劑，可與相對應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合而出現(xiàn)間接凝集反應(yīng)；③協(xié)同凝集反應(yīng):間接凝集反應(yīng)的1種。人們發(fā)現(xiàn)葡萄球菌表面有1種蛋白成分，簡稱A蛋白（SPA）,它是一種*抗原，可與人和多種哺乳動(dòng)物血清中的免疫球蛋白G（IgG）的Fc段呈非特異性結(jié)合。IgG的Fc段與A蛋白結(jié)合后，仍能充分暴露出IgG特異的Fab部分，再與其對應(yīng)的抗原呈特異性結(jié)合。根據(jù)A蛋白的這一特點(diǎn),人們將IgG包被在富含A蛋白的葡萄球菌上，再與對應(yīng)的抗原作凝集反應(yīng)。由于葡萄球菌只在此類反應(yīng)中起協(xié)同作用，所以把這一反應(yīng)稱為協(xié)同凝集反應(yīng)。這一反應(yīng)快速而簡便，廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、鉤端螺旋體、病毒等的鑒定和它們所引起的疾病的診斷。
　　沉淀反應(yīng) 　在有適量電解質(zhì)的情況下，可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液、動(dòng)物血清）與對應(yīng)抗體結(jié)合，形成沉淀物的反應(yīng)。由于抗原與抗體在不同的環(huán)境條件下結(jié)合，以及附加因素的不同,沉淀反應(yīng)可分為6類。廣泛被應(yīng)用于鑒定混合系統(tǒng)的蛋白組分，鑒定菌型，診斷疾病以及在法醫(yī)學(xué)上鑒定血跡。
　　球狀沉淀反應(yīng) 　在小口徑的試管內(nèi)，先加入已知抗體的血清，然后在其表面加入待測的抗原，如果兩層液面交界處出現(xiàn)白色沉淀環(huán)，即為陽性反應(yīng)。這一技術(shù)用于抗原的定性試驗(yàn)。
　　凝膠擴(kuò)散 　以瓊脂凝膠或其他類似物質(zhì)為介質(zhì)進(jìn)行的沉淀試驗(yàn)。把抗原和抗體分別放在介質(zhì)中，經(jīng)擴(kuò)散后，抗原與抗體相遇處就形成沉淀線。凝膠擴(kuò)散可用于抗原-抗體系統(tǒng)的定性和定量分析。凝膠擴(kuò)散法分為單向和雙向兩類。
　　對流免疫電泳 　在電場作用下進(jìn)行的雙向凝膠擴(kuò)散。其原理是：在通電的瓊脂中，抗原和抗體向相反的電極移動(dòng),當(dāng)它們在zui適宜的比例處相遇時(shí),可形成白色的沉淀線。實(shí)際上，這是一種加速的雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。試驗(yàn)所需時(shí)間短、敏感性高，但特異性比較差。一般用于各類蛋白的定性分析和半定量測定。
　　電泳免疫擴(kuò)散法（火箭電泳） 　在電場下進(jìn)行的單向瓊脂擴(kuò)散。用于檢查標(biāo)本中某一Ig或抗原的含量。方法是：將含有已知抗體的瓊脂制成瓊脂板,待冷凝后,在瓊脂板的陰打一排小孔，向各孔中加入定量的待檢樣品和不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)抗原。經(jīng)電泳后，抗原在擴(kuò)散過程中與抗體結(jié)合,在適宜比例處形成錐形的沉淀峰,其形狀如火箭。沉淀峰的高低與抗原濃度成正比。利用這一方法，能較快地測出標(biāo)本中的抗原含量（圖2）。

　　免疫電泳 　將瓊脂電泳和雙向瓊脂擴(kuò)散結(jié)合起來，用于分析抗原組成的定性方法。先將待測樣品放在瓊脂板的小孔中進(jìn)行電泳，然后在瓊脂板*挖一橫槽，加入已知相應(yīng)的免疫血清。兩者相互擴(kuò)散，經(jīng)過一定時(shí)間，在zui適宜的比例處形成沉淀弧。根據(jù)沉淀弧的數(shù)量、位置和外形,即可分析樣品中所含的成分及其性質(zhì)（圖3）。正常人血清經(jīng)免疫電泳后，顯示白蛋白和幾種球蛋白的沉淀線。

　　補(bǔ)體系統(tǒng)參與的反應(yīng) 　在試驗(yàn)室進(jìn)行測定時(shí)，常用新鮮的豚鼠血清作為補(bǔ)體的來源。
　　補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 　在補(bǔ)體參與下，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素（在以綿羊紅細(xì)胞注射動(dòng)物所得的免疫血清中含有的特異性抗體）作為指示系統(tǒng)的抗原－抗體反應(yīng)。包括2個(gè)系統(tǒng)、5種成分，①被檢系統(tǒng)：包括已知的抗體（或抗原）和被檢的抗原（或抗體）兩種成分；②指示系統(tǒng)：包括綿羊紅細(xì)胞和溶血素以及補(bǔ)體 3個(gè)成分。使被檢系統(tǒng)的抗原、抗體并加上補(bǔ)體作用一定時(shí)間，再加入指示系統(tǒng)繼續(xù)作用一定時(shí)間，如果不發(fā)生溶血，即為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽性。如果出現(xiàn)溶血反應(yīng)，即為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰性。
　　本試驗(yàn)可用已知的抗血清檢出和鑒定抗原，也可用已知的抗原檢測血清中的抗體，特別在病毒學(xué)中應(yīng)用較多（圖4）。

　　免疫粘附血凝試驗(yàn) 　根據(jù)抗原－抗體復(fù)合物在C₃存在時(shí)能粘附到靈長類紅細(xì)胞或非靈長類血小板上的現(xiàn)象檢查抗原或抗體的方法。這一方法是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的，具有高度敏感性。其原理是：抗原-抗體-補(bǔ)體（C₁₄₂）的復(fù)合物可以吸附數(shù)百個(gè)C₃分子，而活化后的每個(gè)C₃分子又可與有C₃受體的指示細(xì)胞（如人的O型紅細(xì)胞）發(fā)生粘附作用,所以只要試驗(yàn)系統(tǒng)中存在極少量的抗原-抗體復(fù)合物，就可通過與補(bǔ)體系統(tǒng)作用使紅細(xì)胞凝集。此方法操作簡便、不用溶血素、不需滴定補(bǔ)體，可用于檢測病人血清中有無乙型肝炎表面抗原。

中和試驗(yàn) 　將抗體與毒素或病毒結(jié)合，使毒素失去毒性或使病毒失去傳染力的免疫學(xué)試驗(yàn)。可用以輔助診斷疾病，或鑒定病毒、某些未知病原體和毒素等。能在動(dòng)物、雞胚或組織培養(yǎng)中進(jìn)行。
　　毒素中和試驗(yàn) 　檢定外毒素或抗毒素的技術(shù)。通常將一定量的一方（如外毒素）與遞增稀釋度的另一方（如抗毒素）混合，接種于適當(dāng)?shù)膭?dòng)物體，然后觀察動(dòng)物的死亡情況。如果毒素過多，可以引起特殊的癥狀與死亡。如果抗毒素過量，動(dòng)物則不發(fā)生任何可見的反應(yīng)。以半數(shù)動(dòng)物的存活情況定出中和指數(shù)。
　　病毒中和試驗(yàn) 　用于檢查患過某些病毒疾病或免疫機(jī)體血清中抗體的增長情況的方法。也可用于鑒定病毒和研究抗原結(jié)構(gòu)。一般用不同稀釋度血清與定量病毒等量混合，放置一定時(shí)間，然后接種到細(xì)胞培養(yǎng)管中，每天觀察細(xì)胞病變，以能抑制細(xì)胞病變的血清zui高稀釋度作為終點(diǎn)效價(jià)。這一試驗(yàn)多采用細(xì)胞培養(yǎng)，比動(dòng)物和雞胚試驗(yàn)經(jīng)濟(jì)而方便。中和抗體特異性高，維持時(shí)間較長，是流行病學(xué)調(diào)查常用的方法。
　　抗鏈球菌溶血素 “O”試驗(yàn) 　中和試驗(yàn)的一種。有的細(xì)菌能產(chǎn)生溶解紅細(xì)胞的毒素，如乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生溶解人或兔紅細(xì)胞的鏈球菌溶血素“O”。因其抗原性強(qiáng)，能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，當(dāng)該毒素遇到相應(yīng)抗體時(shí)，則被中和而不出現(xiàn)溶血。目前臨床診斷風(fēng)濕病所用的抗“O”試驗(yàn),就是用以測定患者血清中鏈球菌溶血素“O”抗體的中和試驗(yàn)。如果這種抗體在患者血清中高于正常值，即表明患者不久前或目前有溶血性鏈球菌感染。
　　抗血清的制備 　含有某類具特異性免疫功能的抗體分子的血清制備。一般為給動(dòng)物人工注射某類抗原后所制備的動(dòng)物血清。常用的動(dòng)物有馬、羊、兔、豬、豚鼠和小鼠等。價(jià)的抗血清用于疾病的預(yù)防、診斷和治療，或作為研究工作的手段。注射抗原時(shí)加入佐劑，可增加抗原的免疫原性和延長抗原在機(jī)體內(nèi)存留的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室常選用家兔制備抗血清。
　　　　　　　

皮膚試驗(yàn)（皮試）

　　借助于抗原與抗體或抗原與致敏淋巴細(xì)胞在皮膚的反應(yīng)而進(jìn)行診斷的免疫學(xué)試驗(yàn)。根據(jù)反應(yīng)機(jī)制可把皮試分為下述兩大類：
　　中和反應(yīng)的皮膚試驗(yàn) 　例如錫克氏試驗(yàn)系白喉毒素皮內(nèi)試驗(yàn)法，用以調(diào)查人群對白喉有無免疫力。其方法是：用一定量白喉毒素注射到受試者前臂的皮內(nèi)，如于24～28小時(shí)后局部紅腫，直徑達(dá)1～2厘米，即為陽性反應(yīng)，表明受試者沒有免疫力；如果局部不出現(xiàn)紅腫，則為陰性反應(yīng)，表明受試者血清中含有足夠量的抗毒素抗體，能中和注入的毒素，因而有免疫力。又如狄克氏試驗(yàn)是用鏈球菌紅斑毒素作皮膚試驗(yàn)，用以測定對猩紅熱有無易感性。
　　超敏反應(yīng)的皮膚試驗(yàn) 　分遲發(fā)型和速發(fā)型兩種：
　　遲發(fā)型超敏反應(yīng)皮試 　體內(nèi)測定病人細(xì)胞免疫的重要方法。陽性者在抗原注入皮膚后48～72小時(shí)內(nèi)，局部呈現(xiàn)紅腫。常用的生物性抗原是由病原體提制的抗原，如結(jié)核菌素、白色念珠菌素、皮膚毛癬菌素、鏈激酶－鏈道酶、腮腺炎病毒皮試抗原等。此法的優(yōu)點(diǎn)，是受試者可能在過去接觸抗原的過程中已被致敏，檢查時(shí)可以直接進(jìn)行皮試，不需要致敏的過程。缺點(diǎn)是受試者過去接受抗原的量與時(shí)間不同,即致敏情況不同,因而皮膚反應(yīng)個(gè)體差異大，往往對同一受試者須同時(shí)用多種抗原進(jìn)行皮試，才能判斷其細(xì)胞免疫功能。常用的化學(xué)抗原為2，4-二硝基氟苯（DNFB）。用這類抗原作皮試的優(yōu)點(diǎn),是可使大批受試者同時(shí)接受等量的從未接觸過的抗原刺激，便于比較個(gè)體間的差異，測出機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的整個(gè)環(huán)節(jié)；其缺點(diǎn)是皮試前必須有2～3周的致敏過程，所需時(shí)間過長，而且會(huì)引起強(qiáng)烈的反應(yīng)。這類抗原不宜用于兒童。此外，也用植物血凝素（PHA）作皮試,以測定人體的細(xì)胞免疫功能。
　　速發(fā)型超敏反應(yīng)皮試 　用于測定病人的體液抗體，尤其是lgE。例如,在注射*或抗血清進(jìn)行治療之前，先把小量稀釋的制劑注射到病人皮內(nèi)，如果病人體內(nèi)有參與過敏反應(yīng)的lgE,10～30分鐘注射處即呈現(xiàn)紅腫，為陽性反應(yīng)。這一試驗(yàn)原理可用于檢測速發(fā)型超敏反應(yīng)（變態(tài)反應(yīng)）的變應(yīng)原。
　　　　　 　

細(xì)胞免疫測定法

　　用體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)測定細(xì)胞免疫功能的方法。體內(nèi)試驗(yàn)主要是作皮試，測定遲發(fā)型超敏反應(yīng)（見上節(jié)皮膚試驗(yàn)），常在診斷腫瘤或免疫缺陷病時(shí)使用。體外試驗(yàn)的方法有淋巴細(xì)胞分離技術(shù)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、巨噬細(xì)胞抑制試驗(yàn)、玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)（包括總數(shù) E玫瑰花結(jié)試驗(yàn)）、吞噬試驗(yàn)、四唑氮藍(lán)試驗(yàn)、嗜鹼粒細(xì)胞脫粒試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及組織定型試驗(yàn)和組織配型試驗(yàn)等。
　　細(xì)胞分離技術(shù) 　細(xì)胞免疫試驗(yàn)中，從血液或免疫系統(tǒng)器官中提取所需細(xì)胞的技術(shù)。20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的激發(fā)熒光細(xì)胞分類技術(shù)是借助熒光激發(fā)細(xì)胞分離器，從周圍的血中直接分離和收集所需要的不同種類的細(xì)胞，如粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血小板等。由于每種細(xì)胞對熒光素的結(jié)合不同,所以可用激光束照射單行流動(dòng)的細(xì)胞,以激發(fā)熒光。然后收集聚焦后的熒光，用以測量細(xì)胞結(jié)合熒光素的多少，再收集經(jīng)過含細(xì)胞微滴的激光，測量細(xì)胞的大小。利用光電效應(yīng),可使微滴帶上不同的電荷,通過電場，細(xì)胞即能高速度、高純度地分開。這一技術(shù)不僅能區(qū)別淋巴細(xì)胞及其亞類，而且可對正常血細(xì)胞、白血病細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞、培養(yǎng)的正常細(xì)胞和培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分。
　　其他的細(xì)胞分離技術(shù)很多，其原理不外是利用各種細(xì)胞在理化性質(zhì)、表面標(biāo)記和細(xì)胞功能等方面的差別，將不同的細(xì)胞分開。淋巴細(xì)胞和部分粒細(xì)胞留在上清部分。在出現(xiàn)紅細(xì)胞與血漿的界面時(shí)，血漿層底部含有豐富的淋巴細(xì)胞。若在抗凝的全血中加入葡聚糖或明膠，可促進(jìn)紅細(xì)胞聚集，加速紅細(xì)胞下沉。另外一個(gè)方法是梯度離心法，利用聚蔗糖－*分層液，它的比重（1.077）小于紅細(xì)胞和粒細(xì)胞而大于淋巴細(xì)胞,它的粘度適合紅細(xì)胞和粒細(xì)胞的聚集。在試驗(yàn)時(shí)，先將抗凝血放在分層液的液面上，然后用適當(dāng)?shù)乃俣入x心，淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞即沉積于分層液與血漿的界面（其中淋巴細(xì)胞占80％以上），其他細(xì)胞則沉落管底。
　　在分離淋巴細(xì)胞的亞群（T細(xì)胞和B細(xì)胞）時(shí)，常使用本文后面介紹的E玫瑰花結(jié)和EAC玫瑰花結(jié)技術(shù)。
　　淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 　T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),受到非特異性有絲分裂原（如植物血凝素、美洲商陸）或特異性抗原（如結(jié)核菌素、純蛋白衍化物）刺激后，可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞并進(jìn)行有絲分裂。轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞不僅呈現(xiàn)不成熟的母細(xì)胞形體（胞體變大、細(xì)胞漿豐富、細(xì)胞核內(nèi)核仁清晰可見），而且呈現(xiàn)蛋白質(zhì)和核酸合成的增加，還合成并釋放淋巴毒素、移動(dòng)抑制因子等淋巴因子。現(xiàn)在我們可以采取形態(tài)學(xué)的方法，或者以³H標(biāo)記胸腺嘧啶摻入量的增加來判定淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率。
　　目前常用的以植物血凝素刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的試驗(yàn)是非特異性的，轉(zhuǎn)化率的高低只反映病人總的細(xì)胞免疫功能。正常人的轉(zhuǎn)化率約為70％左右。用結(jié)核菌純蛋白衍化物進(jìn)行淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，是以特異性抗原去刺激被結(jié)核菌蛋白致敏過的T細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化率一般為5～30％，它既能反映機(jī)體的總的細(xì)胞免疫功能,又能反映人體對這種特異性抗原的細(xì)胞免疫情況。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)可用于測定結(jié)核、布氏桿菌病、慢性肝炎等傳染病的細(xì)胞免疫功能，判斷腫瘤的療效和預(yù)后。
　　巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn) 　一種特異性細(xì)胞免疫測定法。當(dāng)致敏淋巴細(xì)胞在人工培養(yǎng)條件下再次遇到同樣抗原時(shí)，或其他一些非特異性有絲分裂原，如植物血凝素、美洲商陸、刀豆素A等,都可激發(fā)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生移動(dòng)抑制因子，此種因子能夠抑制巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞的移動(dòng)。通過測定移動(dòng)抑制的程度，可以了解機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞免疫狀態(tài)。在一般情況下，這種體外特異性移動(dòng)抑制試驗(yàn)的結(jié)果,往往與遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)皮膚試驗(yàn)相一致。目前,這一試驗(yàn)已應(yīng)用于檢測腫瘤、器官移植和自身免疫性疾病。
　　玫瑰花結(jié)試驗(yàn) 　利用細(xì)胞吸附的原理測定細(xì)胞表面受體的方法。因具有相應(yīng)結(jié)構(gòu)的某些細(xì)胞可吸附在淋巴細(xì)胞周圍，形成玫瑰花的形狀而得名。
　　在人體外周血的淋巴細(xì)胞中，T細(xì)胞和B細(xì)胞的表面受體有所不同，前者具有與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合的受體，后者約90％具有C₃受體，能與補(bǔ)體結(jié)合。根據(jù)這種不同的表面標(biāo)志，可將外周血中的T細(xì)胞和B細(xì)胞區(qū)別開。
　　E玫瑰花結(jié)試驗(yàn) 　人的T細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞的受體，它是一種糖蛋白，能與綿羊紅細(xì)胞表面糖肽相結(jié)合。將被檢的淋巴細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞懸液，在一定條件下混合孵育后再染色鏡檢,可見到許多吸附有綿羊紅細(xì)胞（至少3個(gè)以上）的淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞）呈玫瑰花狀，稱E玫瑰花結(jié)（紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)）。能形成 E玫瑰花結(jié)的不僅是人的T細(xì)胞，還有豚鼠、豬、狗和牛等動(dòng)物的T細(xì)胞。除綿羊紅細(xì)胞外，山羊、家兔、豬、馬、狗、猩猩和猴等動(dòng)物以及人的紅細(xì)胞,均可作為E玫瑰花結(jié)的指示細(xì)胞。不同種系的淋巴細(xì)胞只能與某些種的紅細(xì)胞結(jié)合形成 E玫瑰花結(jié)。
　　EAC玫瑰花結(jié)試驗(yàn) 　補(bǔ)體、抗人（雞、鴿、豚鼠、?；蜓颍┘t細(xì)胞抗體和人（雞、鴿、豚鼠、?；蜓颍┘t細(xì)胞結(jié)合成EAC（E指erythrocyte,細(xì)細(xì)胞、抗體、補(bǔ)體）復(fù)合物。90％的人B細(xì)胞表面有補(bǔ)體受體，可以吸附EAC形成玫瑰花結(jié)。
　　EAC玫瑰花結(jié)用于測定外周血中具有補(bǔ)體受體的B細(xì)胞數(shù)，正常值為13～25％。但在慢性淋巴細(xì)胞白血病和全身性紅斑狼瘡患者的外周血中,EAC玫瑰花結(jié)形成的細(xì)胞增多；在患體液免疫缺陷病時(shí)，B細(xì)胞顯著下降。
　　吞噬試驗(yàn) 　用于觀察機(jī)體免疫狀態(tài)的試驗(yàn)。也可作為判斷療效的指標(biāo)。體外法采全血（人、動(dòng)物）或腹腔液（動(dòng)物），用抗凝劑洗滌其中的吞噬細(xì)胞，加入細(xì)菌或其他顆粒（紅細(xì)胞、膠體炭粒、聚苯乙烯球形顆粒），在37℃水浴中孵育一定時(shí)間，然后涂片染色，計(jì)算每個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬細(xì)菌（或其他顆粒）數(shù)目的平均值。由于人體取材困難，中國首先創(chuàng)用斑蟊酒精提取液刺激皮膚產(chǎn)生水泡，從中抽取含有大量巨噬細(xì)胞的滲出液，然后進(jìn)行體外測定。
　　動(dòng)物試驗(yàn)常用體內(nèi)法，一般作炭粒清除，即由靜脈注入膠體炭粒制劑，經(jīng)過一定時(shí)間后取血檢查剩余顆粒的濃度，并以血流清除炭粒的速度來說明單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬活性。此外，還可采用注入類脂懸液、熒光顆粒、磷酸鉻和用碘標(biāo)記的蛋白等方法。
　　四唑氮藍(lán) （NBT）試驗(yàn) 　測定中性粒細(xì)胞內(nèi)殺菌功能的簡單方法。中性粒細(xì)胞在殺菌過程中能量消耗驟增，氧的消耗量增加，磷酸己糖支路糖代謝活力增強(qiáng)，葡萄糖分解的中間產(chǎn)物（6-磷酸葡萄糖），在此支路中氧化脫氫而成5-磷酸戊糖，所脫的氫原子被外加的四唑氮藍(lán)接受，將淺黃色的氧化型還原成點(diǎn)狀或塊狀的藍(lán)黑色甲顆粒,沉積于中性粒細(xì)胞的胞漿中。這種細(xì)胞稱為NBT陽性細(xì)胞或甲細(xì)胞。試驗(yàn)時(shí)，先采病人耳血，加入肝素抗凝，與NBT液混合孵育,然后離心、制片、染色鏡檢、觀察計(jì)數(shù)。細(xì)菌性疾病的 NBT陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和總數(shù)明顯高于正常，病毒性疾病的數(shù)值則與正常無異。因此，目前用此法鑒別細(xì)菌性疾病和非細(xì)菌性疾病。
　　嗜堿粒細(xì)胞脫粒試驗(yàn) 　協(xié)助臨床診斷速發(fā)型超敏反應(yīng)的體外試驗(yàn)。血液中的嗜堿粒細(xì)胞和組織中的肥大細(xì)胞內(nèi)部充滿含有組織按、5-羥色胺等活性介質(zhì)的顆粒，而表面上則存在有與過敏抗體F_C段結(jié)合的受體，當(dāng)過敏抗體結(jié)合到細(xì)胞表面上而使細(xì)胞致敏時(shí)，如果再加入相應(yīng)的過敏抗原，兩者結(jié)合可使細(xì)胞脫出顆粒并釋放活性介質(zhì)，從而引起速發(fā)型超敏反應(yīng)。
　　過敏抗體有兩類：一是過敏反應(yīng)的lgE類抗體,能與大白鼠腹液中的肥大細(xì)胞結(jié)合;另一是過敏反應(yīng)的lgG類抗體，可與家兔血中嗜堿粒細(xì)胞結(jié)合。
　　試驗(yàn)方法有①直接法：取病人外周血中的嗜堿粒細(xì)胞,加上可疑的相應(yīng)抗原；②間接法:用家兔血中的嗜堿粒細(xì)胞或大鼠腹腔液中的肥大細(xì)胞，加上病人的血清和可疑的相應(yīng)抗原。當(dāng)過敏抗原與過敏抗體相結(jié)合時(shí)，細(xì)胞中的顆粒便被脫出?？捎弥行约t或詹納斯綠作超活體染色鏡檢，計(jì)算脫粒的細(xì)胞數(shù)，借以觀察被試人血清中有無過敏抗體。
　　組織定型試驗(yàn) 　在組織移植中，測定供者和受者有核細(xì)胞表面組織相容性抗原的種類及其相容程度的方法。在同種異體間進(jìn)行組織或臟器移植之前，先作組織相容性抗原（人白細(xì)胞抗原HLA）的檢查,了解供者與受者之間的組織相容程度，選擇zui合適的供者，可提高移植的成功率。
　　微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn) 　用已知的單價(jià) HLA抗原特異性抗血清測定淋巴細(xì)胞表面是否具有相應(yīng)的 HLA抗原的方法。先使細(xì)胞、抗體和補(bǔ)體在一定溫度條件下作用一定時(shí)間，然后檢查細(xì)胞的活存數(shù)。將供者和受者的淋巴細(xì)胞分別加入標(biāo)準(zhǔn)的抗HLA血清，再加入家兔的補(bǔ)體,然后加入伊紅染料鏡檢。如果淋巴細(xì)胞腫大,染成深色,呈現(xiàn)死亡狀態(tài),即表示該淋巴細(xì)胞具有這種HLA抗原。反之，如果淋巴細(xì)胞未被殺死，活存細(xì)胞保持著較小體形，呈光亮的正常形態(tài),即表示不含有該種HLA抗原。在進(jìn)行交叉配型時(shí)，可采用同樣的操作方法，給供者的淋巴細(xì)胞加入受者的新鮮血清（抗HLA血清）,如果受者的血清使供者的淋巴細(xì)胞死亡，即表明受者的血清中存在抗供者的組織細(xì)胞抗體，供者和受者之間的組織相容性程度差，不能選作移植供者。
　　組織相容性配合試驗(yàn) 　測定受者與供者組織相容性抗原總量有無差異或相似程度的方法。體外試驗(yàn)應(yīng)該采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的方法。雙向法是將供者和受者的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，如果二者的組織相容性抗原不相容，就會(huì)發(fā)生相互間的刺激，使雙方淋巴細(xì)胞出現(xiàn)母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。單向法是將供者的淋巴細(xì)胞先用絲裂霉素或 X射線處理，使其失去轉(zhuǎn)化和合成DNA的能力,但仍保持能夠刺激對方細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的抗原特異性，然后，將處理過的供者淋巴細(xì)胞與未處理過的受者淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，如果出現(xiàn)轉(zhuǎn)化，即為陽性反應(yīng)，表明二者的組織相容性抗原不相符合。凡有親緣關(guān)系的，呈弱陽性反應(yīng)；凡是組織相容性抗原有很大差異的，呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。
　　　　　 　　

標(biāo)記免疫技術(shù)

　　用各種標(biāo)記物標(biāo)記抗原（或抗體），測定相應(yīng)的抗體（或抗原）的方法。這種技術(shù)具有高度敏感性和特異性，因而得到廣泛應(yīng)用。根據(jù)標(biāo)記方法的不同，主要分為熒光抗體技術(shù)（在抗體上標(biāo)記熒光色素）、放射免疫測定（在抗原或抗體上標(biāo)記放射性同位素）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（在抗原或抗體上結(jié)合適當(dāng)?shù)拿福?。熒光抗體技術(shù)和放射免疫測定雖然應(yīng)用較廣，但又各有缺點(diǎn)：前者操作時(shí)間長，肉眼觀察結(jié)果不可靠，也不能定量和自動(dòng)化；后者自動(dòng)化設(shè)備價(jià)格太高，放射性同位素試劑的半衰期很短，而且會(huì)危及人體的健康。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)具有上述兩法的優(yōu)點(diǎn)而無其缺點(diǎn)，是一種敏感、快速而簡便的方法。
　　熒光抗體技術(shù) 　以熒光色素標(biāo)記抗體，制備成熒光抗體（簡稱FA），然后用這種熒光抗體涂染被檢查的標(biāo)本，再以紫外線光源的熒光顯微鏡進(jìn)行檢查。如果見到有發(fā)出熒光的抗原抗體反應(yīng)物，即表明標(biāo)本中有與熒光抗體相對應(yīng)的抗原而被熒光抗體著染。這一技術(shù)的操作有直接和間接兩種方法：直接法是以熒光素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)抗原結(jié)合，用于檢測未知的抗原；間接法是將未標(biāo)記的抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合起來，再加上用熒光素標(biāo)記的抗抗體，形成抗原-抗體-熒光抗抗體復(fù)合物，用于檢測未知的抗原或抗體。因?yàn)殚g接法所用標(biāo)記的抗抗體是抗球蛋白抗體，能與所有的同種屬的抗體結(jié)合，所以比直接法方便，而且敏感性高。
　　利用此項(xiàng)技術(shù)可以比較準(zhǔn)確、迅速、敏感地測出少量抗原、抗體以及抗原－抗體復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)或組織內(nèi)的定位和分布。此項(xiàng)技術(shù)已應(yīng)用于免疫學(xué)、細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、腫瘤學(xué)的基礎(chǔ)理論研究以及臨床快速診斷（圖5）

放射免疫技術(shù)

　　將高靈敏度的同位素示蹤法和高特異性的抗原抗體免疫化學(xué)反應(yīng)結(jié)合使用的技術(shù)。它由于兼?zhèn)渖鲜鰞煞N技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，近20年來，已成為發(fā)展迅速、用途廣泛的定性、定量和定位的檢測方法。選用適當(dāng)?shù)姆派湫酝凰貥?biāo)記抗原，并與*的抗體結(jié)合，形成可逆性的標(biāo)記抗原－抗體復(fù)合物。如果加入待測的非標(biāo)記抗原，則標(biāo)記抗原與非標(biāo)記抗原共同爭奪*抗體，zui后達(dá)到平衡狀態(tài)。加入的非標(biāo)記抗原越多，標(biāo)記抗原與抗體的結(jié)合就越少。
　　放射免疫技術(shù)已廣泛應(yīng)用于測定各種激素、腫瘤相關(guān)抗原（甲胎蛋白、癌胚抗原）、藥物（地高辛、*等）、病毒抗原（乙型肝炎表面抗原）以及l(fā)g等，其靈敏度可達(dá)10^-9～10^-15克/毫升，為目前zui靈敏的分析方法，并有自動(dòng)化設(shè)備。
　　　　　 　

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

　　簡稱酶標(biāo)法，是20世紀(jì)70年代新開展的一項(xiàng)免疫血清學(xué)技術(shù)。當(dāng)抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面時(shí)，仍能保持自己的免疫活性。把抗原或抗體與酶的結(jié)合物再與相應(yīng)的抗體或抗原結(jié)合，即可根據(jù)加入酶底物的顏色來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。顏色的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量成正比。酶標(biāo)法和放射免疫技術(shù)同是既特異又敏感的方法。
　　酶標(biāo)法中zui常用的是間接法和雙抗體夾心法。間接法用于測定抗體。雙抗體夾心法用于測定抗原。另外，還有與放射免疫試驗(yàn)相似的競爭法，即利用抗原對抗體的競爭性結(jié)合來檢測未知的小分子抗原或半抗原（圖6）。

　　酶標(biāo)法具有特異、敏感、快速、簡便和經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，原則上可用于檢測一切抗原、半抗原和抗體。目前已用酶標(biāo)法測定血清蛋白質(zhì)、腫瘤抗原、激素、藥物、各種微生物和寄生蟲的抗原，以及上述各種抗原所產(chǎn)生的相應(yīng)抗體。在臨床診斷、疾病普查、法醫(yī)鑒定、獸醫(yī)檢查、植物病害檢驗(yàn)等方面應(yīng)用廣泛。