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用戶指南
Amicon® Ultra-4 超濾離心管
適用于體積不超過(guò)4 mL的樣本

僅供研究使用；不適用于診斷程序
默克生命科學(xué)部
內(nèi)容提要
產(chǎn)品簡(jiǎn)介............................................................................................................................................................ 3
操作步驟..................................................................................................................................................... 4-5
常見(jiàn)結(jié)果數(shù)據(jù)參考...................................................................................................................................... 6-8
zui大化樣本回收率與量化回收.................................................................................................................. 8-9
產(chǎn)品規(guī)格.......................................................................................................................................................... 9
化學(xué)相容性....................................................................................................................................................10
訂購(gòu)信息........................................................................................................................................................11
附：常見(jiàn)問(wèn)題與解答............................................................................................................................... 12-13
常用超濾產(chǎn)品列表.....................................................................................................................................14
新產(chǎn)品介紹：純化超濾管，攪拌式超濾杯..................................................................................................15
簡(jiǎn)介
應(yīng)用
所提供的材料
Amicon® Ultra-4超濾離心管具有快速超濾功能，能夠達(dá)到較高的濃縮倍數(shù)，輕松實(shí)現(xiàn)從稀釋和復(fù)雜
的混和樣本中濃縮回收目的產(chǎn)物。垂直設(shè)計(jì)的超濾膜以及較大的有效濾膜表面積有助于快速的樣本
處理，獲得較高的樣本回收率（通常>90%），并達(dá)到80倍的濃縮。根據(jù)標(biāo)稱分子量限值（NMWL）的不
同，典型處理時(shí)間為10-40分鐘。超濾膜的垂直設(shè)計(jì)也zui大程度降低了溶質(zhì)極化造成的濾膜結(jié)垢；死
體積設(shè)計(jì)能有效防止過(guò)度離心使樣本干掉而造成樣本損失。Amicon® Ultra-4超濾管未經(jīng)消毒，僅供
一次使用。
Amicon® Ultra-4產(chǎn)品系列包括5種不同的截留分子量（MWCO,或標(biāo)稱分子量限值NMWL）。這些超
濾管僅供研究使用，不適用于診斷程序。
Amicon® Ultra-4超濾管提供了一個(gè)蓋子，一個(gè)超濾內(nèi)管和一個(gè)離心外管。
濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸（DNA/RNA樣本，單鏈或雙鏈）、噬菌體等微生物樣本，外泌體
（exosome），微粒（如微珠、納米材料）等
純化組織培養(yǎng)提取液或細(xì)胞裂解液中的大分子成分，去除反應(yīng)液中的引物、接頭或分子標(biāo)記，在
HPLC前去除蛋白質(zhì)
除鹽，緩沖液更換，或滲濾
Amicon® Ultra 3K 超濾管 — 3,000 NMWL
Amicon® Ultra 10K 超濾管 — 10,000 NMWL
Amicon® Ultra 30K 超濾管 — 30,000 NMWL
Amicon® Ultra 50K 超濾管 — 50,000 NMWL
Amicon® Ultra 100K 超濾管 — 100,000 NMWL
3
超濾內(nèi)管
濾出液收集管（離心外管）
蓋子
1. 向Amicon® Ultra超濾離心管加入不超過(guò)4 mL的樣本（如果使用23°定角轉(zhuǎn)子，則為3.5mL）。
2. 將蓋好蓋子的超濾離心管放入離心轉(zhuǎn)子（為擺桶轉(zhuǎn)子）中，用一個(gè)類似的超濾管平衡。
3. 如果使用擺桶轉(zhuǎn)子，以zui大4,000 x g離心約10–40分鐘。如果使用定角轉(zhuǎn)子，使超濾內(nèi)管的膜面朝
上，對(duì)于Amicon® Ultra 3K、10K、30K和50K的超濾管以zui大7,500xg離心約10–40分鐘；對(duì)于
Amicon® Ultra 100K的超濾管以zui大5,000 x g離心約10–20分鐘。
說(shuō)明：關(guān)于典型的離心時(shí)間，請(qǐng)參考圖1和圖2以及表2和表3
4. 回收濃縮產(chǎn)物時(shí)將移液管（槍頭）插入超濾離心管內(nèi)管，左右移動(dòng)著吸取樣本，以確保*
回收。濾過(guò)液可以保存在離心外管中。
說(shuō)明： 要想達(dá)到理想回收率，離心后請(qǐng)立即取走濃縮后樣本。
脫鹽或滲濾（Diafiltration）
脫鹽、更換緩沖液或滲濾是從含有生物分子的溶液中去除鹽分或溶劑的重要方法。鹽分去除或緩沖液更
換可通過(guò)Amicon® Ultra-4超濾管來(lái)完成，具體過(guò)程是濃縮樣本，棄去濾出液，然后向濃縮液中加入任何
所需的溶劑，恢復(fù)到樣本原先的體積。“洗出”的過(guò)程可反復(fù)進(jìn)行，直到雜質(zhì)濃度被充分降低。請(qǐng)參看下面
的例子。
Amicon® Ultra-4超濾管的超濾膜含有痕量甘油。如果擔(dān)心干擾后續(xù)分析，可用緩沖液或Milli-Q® 水
進(jìn)行預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，可用0.1 N NaOH清洗，再用緩沖液或Milli-Q® 水清洗并甩干。
注意：Amicon® Ultra超濾離心管中的濾膜一旦潤(rùn)濕后應(yīng)避免變干。如果在預(yù)清洗后不是立即使
用，則讓液體保留在濾膜上，直到使用。
帶有能容納17mmx124mm 15ml錐底試管的擺桶或定角轉(zhuǎn)子的離心機(jī)，選擺桶轉(zhuǎn)子
注意：為了避免離心過(guò)程中設(shè)備的損壞，在離心之前請(qǐng)清理、檢查設(shè)備。
200μL槍頭（尖頭）用于回收濃縮液
配套設(shè)備與用品
適用性評(píng)估
在嘗試一個(gè)新的應(yīng)用或建立新操作流程時(shí)，建議進(jìn)行初步的回收和截留實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)參看“如何量化回收”
部分。
超濾管的儲(chǔ)存
（15-30℃）室溫存放。
預(yù)清洗
如何使用Amicon® Ultra-4超濾離心管
4
5
性能-蛋白濃度
影響流速的因素包括樣本的濃度、起始體積、溶質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)、相對(duì)離心力、離心轉(zhuǎn)子的角度、濾膜類型以
及溫度。圖1、圖2及表2、表3可用來(lái)估計(jì)各種大小的蛋白質(zhì)達(dá)到特定的濃縮液體積或濃度所需的時(shí)間。
4mL樣本離心時(shí)間一般約需10至40分鐘（取決于超濾管的截留分子量）。盡管大部分樣本在離心開(kāi)始后的
前15至30分鐘過(guò)濾，但一般在離心20至40分鐘后才能達(dá)到zui低濃縮液體積（30–75μL）。
流速
圖1. 典型的濾出液體積與離心時(shí)間（擺桶轉(zhuǎn)子）
離心條件：4,000 × g，室溫，4mL起始體積。
操作樣品：3K和5K超濾管用的樣品是細(xì)胞色素c、30K和50K超濾管用的樣品是BSA，100K超濾管用
的 樣品是IgG。n=6。
旋轉(zhuǎn)濃縮旋轉(zhuǎn)濃縮
4 mL 1 mg/mL
蛋白質(zhì)100 mM
NaCl溶液
50 μL 80 mg/mL
蛋白質(zhì)100 mM
NaCl溶液
100 mM
NaCl
50 μL 80 mg/mL
蛋白質(zhì)11.1 mM
NaCl溶液
11.1 mM
NaCl
加入3.95 mL
10 mM NaCl或
更換緩沖液
4 mL 1 mg/mL
蛋白質(zhì)11.1 mM
NaCl溶液
濾出液體積（mL）
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
3K
10K
30K
50K
100K
旋轉(zhuǎn)時(shí)間（分鐘）
性能-DNA濃縮
Merck Millipore Ltd.已經(jīng)確定，Amicon® Ultra-4 30K 裝置對(duì)范圍從137至1,159的堿基對(duì)雙株DNA
提供回收率與旋轉(zhuǎn)時(shí)間之間的*平衡。
表1. Amicon® Ultra-4 30K裝置的核苷酸典型回收率
雙株DNA堿基對(duì)大小 旋轉(zhuǎn)時(shí)間（分鐘） 濃縮液體積（μL） 回收率（%）
137-1,159 10 50-70 ＞85
旋轉(zhuǎn)條件：定角轉(zhuǎn)子，5,000xg,室溫，2mL起始體積。
圖2. 典型的濾出液體積與離心時(shí)間（定角轉(zhuǎn)子）
離心條件：Amicon® Ultra 3K、10K、30K和50K的超濾管7,500 x g；Amicon® Ultra100K的超濾管
5,000 x g。
操作樣品：3K和5K超濾管用的樣品是細(xì)胞色素c、30K和50K超濾管用的樣品是BSA，100K超濾管用
的 樣品是IgG。n=6。
表2. 典型的濃縮液體積與離心時(shí)間（擺桶轉(zhuǎn)子）
離心條件：4,000 × g，室溫，4 mL起始體積。
所使用的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)：3K和10K為細(xì)胞色素c，30K和50K為BSA，100K為IgG，n=6（3批濾膜
的平均值）。 帶灰色背景的體積數(shù)值將被用來(lái)計(jì)算表5中的蛋白回收率。
6
旋轉(zhuǎn)時(shí)間（分鐘）
濾出液體積（mL）
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
3K
10K
30K
50K
100K
離心時(shí)間
（分鐘）
10 1,369 176 73 32 264
15 – 76 46 – 36
20 478 58 37 30 33
25 228 – – – –
30 159 – – – –
40 94 – – – –
3K超濾管10K超濾管30K超濾管50K超濾管100K超濾管
濃縮液體積(μL)
7
表3. 典型的濃縮液體積與離心時(shí)間（定角轉(zhuǎn)子）
離心條件： Amicon® Ultra 3K、10K、30K和50K的超濾管7,500 x g；Amicon® Ultra100K的超濾管
5,000xg。所使用的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)：3K和10K為細(xì)胞色素c，30K和50K為BSA，100K為IgG，
n=6（3批濾膜的平均值）。 帶灰色背景的體積數(shù)值將被用來(lái)計(jì)算表5中的蛋白回收率。
蛋白質(zhì)截留率回收率
Amicon® Ultra 超濾管的截留分子量（即標(biāo)稱分子量限值NMWL）的定義是；截留超過(guò)特定分子量的分
子。分子量接近NMWL的溶質(zhì)可能只有部分被截留。濾膜的截留率取決于溶質(zhì)的分子大小和形狀。在大
多數(shù)應(yīng)用中，分子量是用來(lái)評(píng)估截留特性的一個(gè)方便的參數(shù)。默克密理博公司（Millipore）建議超濾膜的
NMWL應(yīng)該是想要濃縮的蛋白質(zhì)溶質(zhì)分子量的1／2－1／3。
請(qǐng)參見(jiàn)表3。
表4. 蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的典型截留率
旋轉(zhuǎn)時(shí)間
（分鐘）
10 613 97 42 23 53
15 – 54 30 – 30
20 170 35 22 15 26
25 118 – – – –
30 92 – – – –
40 62 – – – –
3K超濾管10K超濾管30K超濾管50K超濾管100K超濾管
分子量標(biāo)準(zhǔn)/濃度分子量裝置
NMWL 截留率% 擺桶截留率%
定角
離心時(shí)間
（分鐘）
α-胰凝乳蛋白酶原(1 mg/mL) 25,000 3K > 95 > 95 40
細(xì)胞色素c (0.25 mg/mL) 12,400 > 95 > 95 40
維他命B-12 (0.2 mg/mL) 1,350 < 35 < 35 40
α-胰凝乳蛋白酶原(1 mg/mL) 25,000 10K > 95 > 95 15
細(xì)胞色素 c (0.25 mg/mL) 12,400 > 95 > 95 15
維他命B-12 (0.2 mg/mL) 1,350 < 15 < 15 15
BSA (1 mg/mL) 67,000 30K > 95 > 95 10
卵清蛋白(1 mg/mL) 45,000 > 90 > 90 10
細(xì)胞色素c (0.25 mg/mL) 12,400 < 20 < 20 10
維他命B-12 (0.2 mg/mL) 1,350 < 10 < 10 10
BSA (1 mg/mL) 67,000 50K > 95 > 95 10 (SB), 5 (FA)
卵清蛋白(1 mg/mL) 45,000 ~ 60 ~ 65 10 (SB), 5 (FA)
細(xì)胞色素c (0.25 mg/mL) 12,400 < 10 < 10 10 (SB), 5 (FA)
甲狀腺球蛋白 (0.5 mg/mL) 677,000 100K > 95 > 95 15
IgG (1 mg/mL) 156,000 > 90 > 90 15
卵清蛋白(1 mg/mL) 45,000 < 25 < 20 15
濃縮液體積(μL)
大多數(shù)稀釋蛋白的密度與水的密度幾乎相同（即1 g/mL）。利用這一特性，濃縮液和濾出液的體積可
通過(guò)直接稱量并將單位從g轉(zhuǎn)化成mL來(lái)量化。本方法僅適用于濃度不超過(guò)20 mg/mL的溶液。
1. 使用之前，分別稱取空的超濾內(nèi)管和空的濃縮液收集管的重量。
2. 在超濾內(nèi)管中加入溶液（已測(cè)濃度），然后重新稱重。
3. 按說(shuō)明條件離心。
4. 用移液管收集濃縮液，然后將其注入到已經(jīng)預(yù)先稱重的濃縮液收集管。
5. 取出內(nèi)管，稱取內(nèi)管及帶有濾出液的外管的重量。
6. 減去空的內(nèi)管/外管的重量，計(jì)算初始材料、濾過(guò)液及濃縮液的重量。
7. 測(cè)定濾出液及濃縮液濃度。
吸附損失取決于溶質(zhì)濃度及疏水性、操作溫度和時(shí)間、樣本成分及pH。為了zui大限度降低損失，
離心后請(qǐng)立即回收濃縮后的樣本。
如果樣本的起始濃度很高，請(qǐng)監(jiān)控離心過(guò)程，以免樣本過(guò)度濃縮。過(guò)度濃縮會(huì)導(dǎo)致沉淀和樣本損失。
如果樣本穿過(guò)了濾膜，請(qǐng)選擇NMWL較低的Amicon® Ultra-4超濾管。
8
表3和表4的離心條件： 擺桶轉(zhuǎn)子（4,000 × g, 4 mL起始體積），或者定角轉(zhuǎn)子（5,000 × g, 4 mL起始
體積），室溫，n=6（3批濾膜的平均值）。
決定樣本回收率的因素包括相對(duì)于所選裝置的NMWL的蛋白質(zhì)溶質(zhì)的性質(zhì)、起始濃度和濃縮系數(shù)。表4
提供了Amicon® Ultra-4裝置的典型回收率。
表5. 典型的濃縮液回收率
灰色列取自表1和表2。
zui大化樣品回收率
如何量化回收
使用以下方法計(jì)算總回收量、濃縮液回收率%及濾出液回收率%。本程序可算出濃度zui高約20mg/mL
的溶液的回收量近似值。
說(shuō)明： 適當(dāng)?shù)幕?yàn)技術(shù)包括吸收分光光度學(xué)法、放射免疫檢定法、折光率及傳導(dǎo)性。
直接稱重程序
濃縮液體積
（μL）
濃縮系數(shù)
（x）
濃縮液回收率
分子量標(biāo)準(zhǔn)/ （%）
濃度
裝置
NMWL
旋轉(zhuǎn)時(shí)間
（分鐘）
擺桶式定角式擺桶式定角式擺桶式定角式
細(xì)胞色素c
(0.25 mg/mL)
3K 40 94 62 43.5 65.0 98.2 96.7
細(xì)胞色素c
(0.25 mg/mL) 10K 15 76 54 52.3 76.6 97.3 98.5
BSA (1 mg/mL) 30K 10 73 42 56.1 98.6 95.8 95.0
BSA (1 mg/mL) 50K 10 32 23 137.0 177.4 98.8 92.8
IgG (1 mg/mL) 100K 15 (SB ),
10 (FA) 36 53 115.9 56.8 92.2 91.3
濃縮液的樣本回收率低可能是由于吸附損失、過(guò)度濃縮，或樣本穿過(guò)濾膜而造成的。
8. 利用重量/體積數(shù)據(jù)以及所測(cè)出的濃度計(jì)算回收率，方法如下：
濃縮液回收率% = 100 x WC x CC
WO x CO
濾出液回收率% = 100 x Wf x Cf
WO x CO
總回收率% = 濃縮液回收率% + 濾出液回收率%
Wo = 初始材料的重量 Wc = 分析前濃縮液總重量 Wf = 濾出液的重量
Co = 初始材料的濃度 Cc = 濃縮液的濃度 Cf = 濾出液的濃度
產(chǎn)品規(guī)格
zui大初始樣本體積
擺桶和定角轉(zhuǎn)子（35°和45°）
定角轉(zhuǎn)子（23°）
zui終濃縮液體積
zui大的相對(duì)離心力
擺桶轉(zhuǎn)子
定角轉(zhuǎn)子
有效膜面積
尺寸
超濾內(nèi)管和外管（已蓋上蓋子）
長(zhǎng)度
直徑
內(nèi)管
長(zhǎng)度
直徑
超濾管材料
內(nèi)管
超濾膜
外管
外管蓋子及內(nèi)襯
4.0mL
3.5mL
50-100 μL
4,000 x g
7,500 x g，（3K、10K、30K、50K）
5,000 x g，（100K）
3.0cm2
124mm
17.3mm
73.4 mm
17.2mm
苯乙烯共聚物/丁二烯
Ultracel® 低蛋白吸附再生纖維素膜
聚丙烯
聚乙烯
9
10
表5. Amicon® Ultra超濾超濾管的化學(xué)相容性
乙酸
甲酸
鹽酸
乳酸
硝酸
酸 濃度 濃度
≤ 50%*
≤ 5%*
≤ 1.0 M
≤ 3%
≤ 50%

≤ 30%
≤ 3%
≤ 3%
≤ 10%*
≤ 30%*
堿
氫氧化銨 ≤ 10% 氫氧化鈉 ≤ 0.5 M
醇
正丁醇 ≤ 70% 異丙醇 ≤ 70%
乙醇 ≤ 70% 甲醇 ≤ 60%
Alconox®去污劑
CHAPS去污劑
脫氧膽酸鈉
十二烷基硫酸鈉（SDS）
Tergazyme®去污劑
去污劑
≤ 1%
≤ 0.1%
≤ 5%
≤ 0.1%
≤ 1%
Lubrol® PX去污劑
Nonidet™ P-40表面活性劑
Triton® X-100表面活性劑
Tween® 20表面活性劑
≤ 0.1%
≤ 2%
≤ 0.1%
≤ 0.1%
有機(jī)溶劑
丙酮
乙腈
苯


二甲基亞砜（DMSO）
不建議使用
≤ 20%
不建議使用
不建議使用
不建議使用
≤ 5%*
乙酸乙酯
甲醛
吡啶

甲苯
不建議使用
≤ 5%
不建議使用
不建議使用
不建議使用
其他
硫酸銨
焦碳酸二乙酯
二硫蘇糖醇（DTT）
丙三醇
鹽酸胍
咪唑
巰基乙醇
飽和
≤ 0.2%
≤ 0.1 M
≤ 70%
≤ 6 M
≤ 100 mM
≤ 0.1 M
苯酚
磷酸鹽緩沖液（pH 8.2）
聚乙二醇
碳酸鈉
Tris緩沖液（pH 8.2）
尿素
≤ 1%
≤ 1 M
≤ 10%
≤ 20%
≤ 1 M
≤ 8 M
* 與此化學(xué)品接觸可能會(huì)造成過(guò)濾器部件的材料溶出。建議使用空白溶劑來(lái)確定滲出物是否有可
能干擾分析。
化學(xué)相容性
Amicon® Ultra離心超濾管適用于生物液體和水溶液。在使用前，請(qǐng)檢查樣本是否符合超濾管的化學(xué)
相容性。
11
Amicon® Ultra超濾管訂購(gòu)信息


標(biāo)準(zhǔn)保修
適用于本文件中所列產(chǎn)品的保修條款可垂詢適用于您的購(gòu)買交易的“購(gòu)買條款和條件”。
聲明
本文件中的信息隨時(shí)可能更改，恕不另行通知，不能將其視為默克公司或其附屬公司的承諾。默克公
司及其任何附屬公司對(duì)于本文件中可能出現(xiàn)的任何錯(cuò)誤概不負(fù)責(zé)。
(mL)
( μL) 3K 10K 30K 50K 100K
0.5 15–20 Amicon®
Ultra-0.5
device
8
24
96
500
UFC500308
UFC500324
UFC500396
UFC5003BK
UFC501008
UFC501024
UFC501096
UFC5010BK
UFC503008
UFC503024
UFC503096
UFC5030BK
UFC505008
UFC505024
UFC505096
UFC5050BK
UFC510008
UFC510024
UFC510096
UFC5100BK
2 15–70 Amicon®
Ultra-2
device
24 UFC200324 UFC201024 UFC203024 UFC205024 UFC210024
4 50–100 Amicon®
Ultra-4
device
8
24
96
UFC800308
UFC800324
UFC800396
UFC801008
UFC801024
UFC801096
UFC803008
UFC803024
UFC803096
UFC805008
UFC805024
UFC805096
UFC810008
UFC810024
UFC810096
15 150–300 Amicon®
Ultra-15
device
8
24
96
UFC900308
UFC900324
UFC900396
UFC901008
UFC901024
UFC901096
UFC903008
UFC903024
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上樣
體積
濃縮后
終體積
品名個(gè)/
包
截留分子量
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附錄
關(guān)于Amicon®Ultra超濾管的常見(jiàn)問(wèn)題與解答
Q: Amicon®Ultra超濾管的膜材質(zhì)是什么？
A: Amicon®Ultra超濾管的膜材質(zhì)為默克密理博*的 Ultracel®再生纖維素膜，生產(chǎn)工藝嚴(yán)格，截留
分子量明確而，蛋白吸附損失zui小。
Q: 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少？
A: 按照經(jīng)驗(yàn)，建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10倍）。
Q: Amicon®Ultra超濾管可以用于病毒濃縮么？
A: 可以。對(duì)于慢病毒Amicon®Ultra 100kDa; 對(duì)于腺病毒Amicon®Ultra 50kDa。具體的操作
步驟可以參考病毒濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)。另提供AAV（腺相關(guān)
病毒）的制備方法供參考。
Q: Amicon®Ultra超濾管可以用酒精消毒滅菌么？
A: Amicon®Ultra與70%乙醇是兼容的，但是對(duì)滅菌處理的具體方法沒(méi)有做相關(guān)的測(cè)試，所以無(wú)
法提供更進(jìn)一步的參考信息。
Q: Amicon®Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌？
A: Amicon®Ultra都是采用熱封設(shè)計(jì)，不可以用高壓高溫滅菌。
Q: Amicon®Ultra超濾管是否不含RNA酶？
A: 不保證超濾管不包含RNA酶，建議用0.1% DEPC在37度浸泡2小時(shí)，以*滅活RNA酶；殘留的DEPC
可以用Milli-Q®超純水洗滌除去。
Q: 用Amicon®Ultra超濾管去除去污劑是有什么需要注意的嗎？
A: 去污劑因其*的性質(zhì)，當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度（Critical Micelle Concentration, CMC）時(shí)，去污
劑分子會(huì)聚集形成微團(tuán)而改變分子構(gòu)象，這有可能會(huì)影響去污劑的去除效果，具體的操作步驟請(qǐng)
。
Q: 蛋白在濃縮時(shí)出現(xiàn)了沉淀，如何改進(jìn)？
A: 蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的zui終濃度不超過(guò)
20mg/ml。對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進(jìn)方法是：
1） 離心力降為離心力的30%-50%
2） 改用截留分子量更大的超濾管（如原本選用10k，此時(shí)可以選擇30k）
3） 在濃縮過(guò)程中取出超濾管，用槍頭反復(fù)吹吸幾次后再繼續(xù)濃縮
Q: 濃縮后發(fā)現(xiàn)濃縮液中沒(méi)有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon®Ultra超濾管的蛋白zui低起始濃度為25ug/ml。請(qǐng)確保樣本的起始濃度大于這個(gè)濃
度。其次，如果問(wèn)題仍然出現(xiàn)，請(qǐng)不要丟棄樣本濾過(guò)液以便用于分析可能的原因：
1） 如果目的樣本在濾過(guò)液中，那么請(qǐng)排查：
a） 是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b） 使用的離心力是否是在限定范圍內(nèi)？如果使用的是rpm，請(qǐng)換算成相應(yīng)的g離心力，具體換算方
法請(qǐng)垂詢。
c） 離心機(jī)zui近是否有校準(zhǔn)過(guò)？
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d） 是否嘗試這個(gè)蛋白？如果能確保用同樣的超濾管對(duì)其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這
個(gè)目的蛋白的原因。有時(shí)蛋白會(huì)因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影響濃縮效果，建議選用上
一分子量級(jí)別的超濾管（如原本選用30k，此時(shí)可以選擇10k）。
2） 如果目的樣本也不在濾過(guò)液中，那么：
a） 蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？
b） 用來(lái)確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？
c） 目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具體解決方法請(qǐng)參考上面的關(guān)于蛋白沉淀問(wèn)題的解釋。
Q: 有時(shí)候用超濾離心管連水都離不下來(lái)，可能是什么原因？
A: Amicon®Ultra超濾膜中含有微量甘油。 如果出現(xiàn)這種情況，請(qǐng)先用0.1 N NaOH清洗再離心。zui
后用緩沖液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用，如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤(rùn)濕狀
態(tài)，避免重新干燥。
Q: 說(shuō)明書(shū)中在室溫下進(jìn)行離心，考慮到蛋白的穩(wěn)定性，是否可以在4℃進(jìn)行離心？
A： 可以，但是低溫會(huì)增加蛋白樣品的粘性，導(dǎo)致流速減慢，建議可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到原來(lái)的1.5倍。
Q: 如何對(duì)超濾管進(jìn)行去除內(nèi)毒素的處理？
A： 提供的超濾管是沒(méi)有經(jīng)過(guò)去內(nèi)毒素處理的，同時(shí)由于內(nèi)毒素通常以多聚體的形式存在，大小
在10-1000KD之間不等，在超濾的過(guò)程中是無(wú)法去除的?？稍趯?shí)驗(yàn)前通過(guò)先用0.5M NaOH預(yù)清
洗，隨后用Milli-Q®水/緩沖液清洗的步驟去除大部分內(nèi)毒素。關(guān)于針對(duì)Amicon®, Microcon®,
Centricon®嘗試過(guò)的內(nèi)毒素去除方案，
Q: 用濃縮后的蛋白做下游分析時(shí)發(fā)現(xiàn)有干擾，可能有哪些原因？
A: Amicon®Ultra超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析，可用緩沖液或Milli-Q®水預(yù)清洗。如
果干擾仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用緩沖液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。
Q: 懷疑濃縮過(guò)程中目的蛋白和超濾膜之間可能存在非特異性吸附，如何改善？
A：Amicon®Ultra超濾管使用的是再生纖維素膜，這種材質(zhì)是蛋白吸附zui低的超濾膜。但是對(duì)于一些
疏 水性蛋白或非極性蛋白，它們和膜的非特異吸附可能會(huì)增強(qiáng)，對(duì)于這種情況，可以嘗試在實(shí)驗(yàn)前
對(duì)超濾管進(jìn)行封閉處理，也可以嘗試
換成Amicon®Ultra 0.5或2來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過(guò)減小膜面積來(lái)降低非特異性吸附。
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更多濃縮/除鹽/緩沖液置換相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品 典型應(yīng)用 zui大上樣體積
超濾的更多應(yīng)用（歡迎索取詳細(xì)資料）
外泌小體（exosome）標(biāo)準(zhǔn)化制備（新?。?br />濃縮/除鹽/換液一體化操作
抗體標(biāo)記與快速濃縮
易沉淀活性蛋白濃縮
去垢劑的去除
法醫(yī)樣本處理
溫和透析（蛋白復(fù)性）
高通量樣品處理
超濾產(chǎn)品手冊(cè)
快速濃縮、脫鹽換液
核酸快速濃縮、脫鹽換液
去除小分子，質(zhì)譜樣品制備
澄清/ 預(yù)過(guò)濾、除顆粒
快速濃縮、脫鹽換液
快速濃縮、脫鹽換液
快速濃縮、脫鹽換液
大體積樣品濃縮、脫鹽換液
攪拌式溫和濃縮，適用于大體積樣品、
高濃度樣品、易沉淀樣品等
純化/ 濃縮/ 換液一體化操作
溫和透析，蛋白復(fù)性
高通量濃縮、脫鹽換液
慢病毒、腺病毒純化、濃縮
Amicon® Ultra 0.5
Microcon®
Ultrafree®
Amicon® Ultra 2
Amicon® Ultra 4
Amicon® Ultra 15
Centricon® Plus-70
Amicon®
攪拌超濾杯
Amicon® Pro
D-tube™透析管
超濾多孔板
病毒純化試劑盒
500μL（提供中文產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）
500μL
500μL，2mL
2mL
4mL（提供中文產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）
15mL（提供中文產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）
70mL
3mL，10mL，
50mL，200mL，
400mL
10mL（提供中文快捷操作指南）
500μL~15mL
500μL
( 3 次)
簡(jiǎn)單即是美
（配合AU0.5小體積超濾管使用）
Amicon® Pro建立小量蛋白樣品純化-換液/除鹽-濃縮流程 新標(biāo)準(zhǔn)
操作步驟的優(yōu)化與簡(jiǎn)化往往帶來(lái)更好的結(jié)果，數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性、可比性和高
通量化隨之得以改善。默克生命科學(xué)新上市的Amicon® Pro純化超濾管
創(chuàng)造性地將純化、換液、除鹽和濃縮操作融為一體，減少樣品轉(zhuǎn)移損失和人為
操作的繁瑣和誤差，使蛋白樣品的處理更加標(biāo)準(zhǔn)化，數(shù)據(jù)結(jié)果便于評(píng)估和比
較。寶貴的小量樣本從此有了*的操作工具。
步驟少，操作時(shí)間短，結(jié)果好！
親和純化
6次低速離心，總耗時(shí)~100分鐘（含65分鐘孵育時(shí)間）
蛋白親和純化（不做換液和濃縮）
3次低速離心，總耗時(shí)~75分鐘（含60分鐘孵育時(shí)間）
用Protein A或G對(duì)抗體進(jìn)行親和純化
7次低速離心，總耗時(shí)~100分鐘（含60分鐘孵育時(shí)間）
抗體標(biāo)記
5次低速離心，總耗時(shí)~50分鐘
除鹽/緩沖液置換并濃縮
5次低速離心，總耗時(shí)~35分鐘
ACS500024 Amicon® Pro 24Pack（不含AU0.5超濾管）
Amicon®攪拌式超濾杯二代全新上市
您會(huì)為這些升級(jí)倍感欣喜：
人性化的人體工程學(xué)創(chuàng)新設(shè)計(jì)：組裝、拆卸以及開(kāi)關(guān)都極為方便
整體安全性特點(diǎn)：內(nèi)螺紋固定-內(nèi)置壓力鎖/釋放閥設(shè)計(jì)，不再需要原來(lái)難
看又難裝配的外部保護(hù)框架
配套膜片選擇更廣，包括超濾膜和微濾膜以及您自選的膜片
提供操作視頻和中文指南，
50mL，200mL和400mL可選
用于膜通量測(cè)試，濃縮/脫鹽/換液
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Amicon® Pro純化超濾管