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閱讀：269發(fā)布時間：2017-12-25
ELISA試劑盒實(shí)驗中常見疑問及解決方法
這篇文章中就著重為我們敘述一下ELISA試劑盒實(shí)驗中常見疑問及解決方法，如有不全部，還請多指導(dǎo)！
1、挑選試劑
挑選質(zhì)量優(yōu)良的檢查試劑，嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2、加樣
也許因素：
(1) 血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣；
(2) 手藝操作中，加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
(1) 標(biāo)本為血清：將血液先天然寄存1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管，采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次，放置一段時刻后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢查，可放在2-8℃冰箱中，若要儲存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
(2) 加樣后及時放入孵箱。
(3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
(4) 假如選用AT或別的全自動加樣，挑選FAME或別的后處理儀器加酶試劑。
(5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。
3、孵育
也許因素：
(1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸騰，吸附于孔壁，難于清洗*；
(2) 孵育時刻人為延伸，致使非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
(1) 貼封片或加蓋；
(2) 按闡明過程嚴(yán)厲控制操作時刻。
4、洗板
也許因素：
(1) 選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。
(2) 選用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量缺乏，致使洗板不*；洗板針阻塞，抽吸不*；洗板不暢，致使洗板作用差。
(3) 反響板過多形成洗板等候時刻長。
解決辦法：
(1) 確保洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干；
(2) 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
5、顯色
也許因素：
(1) 顯色劑制造后放置時刻過長或運(yùn)用過期顯色劑；
(2) 加顯色劑時濺出孔外形成液體回流。
解決辦法：
(1) 顯色劑盡量在臨用前制造，堅持不期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必；
(2) 加樣時堅持顯色劑不外流；
(3) A、B液應(yīng)避免觸摸金屬器械。
6、停止
也許因素如加停止液時發(fā)生較多氣泡，致使假陽性添加。所以在加停止液時應(yīng)避免發(fā)生氣泡。
7、讀板
如讀板時板底不清洗等。應(yīng)確保酶標(biāo)板清洗。所以在整個操作過程中確保酶標(biāo)板不觸摸次氯酸；盡也許實(shí)現(xiàn)ELISA試劑盒檢查規(guī)范自動化，有用進(jìn)步檢查質(zhì)量。
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