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ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因

閱讀：229發(fā)布時(shí)間：2017-9-20

　　ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因，孫老師在金益柏購(gòu)買了elisa試劑盒，因?yàn)閯偨佑|elisa實(shí)驗(yàn)，還是屬于新手，研究大鼠干擾素相關(guān)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)，做完大鼠γ干擾素ELISA實(shí)驗(yàn)后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時(shí)候梯度還算明顯，但是顯色比較淺，隨著時(shí)間延長(zhǎng)（大概6、7分鐘）以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測(cè)得的值梯度就沒(méi)有了。


　　ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因：


　　1、剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯：顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。


　　2、酶濃度太高，導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的


　　3、包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng)，或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠，


　　4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì)，沒(méi)洗下來(lái)。


　　5、建議：包被、酶標(biāo)重新做梯度，先用較低的濃度把梯度摸索好，然后再優(yōu)化靈敏度，zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍


　　6、有條件的話，可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上，加完底物三分鐘讀數(shù)。


　　7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話，顯色十分鐘就差不多了。


　　8、酶是自己標(biāo)的這種情況的，HRP比例不要太高。


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