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江蘇菲亞生物科技有限公司
主營產品： 轉化生長因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍耳(PRRS)elisa kit |
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如何完善ELISA試劑盒實驗中的過失
2019-5-20 閱讀(1181)
ELISA操作步驟多，新手操作難免會有過失。而這些過失很多是由細節(jié)不夠好造成的，減少過失的方法有很多，比如做實驗時少說話，防止唾液掉進酶標條中。當然，大家還要學會自己發(fā)掘問題，找出原因。那么我們要如何完善ELISA試劑盒實驗中的過失？
①：評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
②：操作前仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進，比如洗板次數(shù)的掌握等。
③：加樣要準確、快速。加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結果。另外，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。
④：檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
⑤：使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
⑥：嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。
⑦：洗滌*，洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
⑧：嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
