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江蘇菲亞生物科技有限公司
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酶免ELISA試劑盒的細(xì)節(jié)處理
2017-5-18 閱讀(957)
一、細(xì)胞裂解液的細(xì)節(jié)處理：
1. 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
2. 收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
3. 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4. 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。
5. 4℃10000×g離心10min，除去細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
二、酶免ELISA試劑盒組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理：
1. 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2. 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分
3. 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。
4. 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
