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上海繼錦化學(xué)科技有限公司
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兔抑癌基因p16 免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2014/3/19閱讀:1170
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保存方法:2-8℃保存。     有效期:一年。     生產(chǎn)日期:見(jiàn)封口。

工作原理:

辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位,具有較高活性及特異性,可溶性佳,生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散,可作用于多種底物,產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng),易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB H2O2存在的情況下,可以作為HRP的電子供體,產(chǎn)生褐色的不溶顆粒,可作為顯色的試劑。

試劑盒內(nèi)容:

 

名稱

規(guī)格

1

0.01mol/L pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液

0.5L

2

PBS緩沖液

1L

3

廣譜二抗

1.5mL

4

30%H2O 2

5mL

5

DAB顯色液I

0.3mL

6

DAB顯色液II

0.3mL

自備試劑:無(wú)水乙醇、蘇木素。

操作步驟

1. 60常規(guī)脫蠟至水后,將石蠟切片先后浸入二甲苯,二甲苯10min。然后逐級(jí)降濃度酒精入水,每次3-5 min。

*

35min

90% 酒精

35min

85% 酒精

35min

75% 酒精

35min

PBS洗滌3

每次5 min

  1. 熱修復(fù)抗原: 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10 min后,反復(fù)1-2 次,置于室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH7.0左右PBS洗滌3次,每次5 min
  2. 消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶:3% H 2 O 2 室溫孵育 5-10 min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5 min

4.滴加一抗: 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上,37孵育一定時(shí)間或者4℃到第二天清晨 pH7.4PBS洗滌3次,每次5 min 。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō),陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;背景過(guò)高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)

  1. 加入廣譜二抗,37℃孵育一段時(shí)間,取出后PBS洗滌3次,每次5 min。
  2. DAB顯色: DAB顯色液III50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間。若無(wú)背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)。
  3. .觀察顯色后自來(lái)水沖,蘇木精復(fù)染1-2min,,自來(lái)水沖10min,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片,干燥,分析拍照

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