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大鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體(GITR)ELISA試劑盒操作步驟

     方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ "、“-"號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二　用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

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技術(shù)問答：

問：人鼻咽癌癌基因抗體能和人鼻咽癌細(xì)胞表面的抗原結(jié)合嗎

答：可以

問：我就是要做免疫組化實驗 樣本是綿羊 需要鼠抗綿羊1型和3型膠原蛋白抗體，二抗是*標(biāo)記綿羊抗小鼠IgG 山羊血清和DAB顯色試劑盒都有 想用SABC法做免疫組化實驗 還需要買些什么呢？

答：我們的免疫組化試劑盒整套基本齊全了，不需要再另外購買什么了，再就是TBS和PBS緩沖液需要自行購買了，這些都不是主要的，一般實驗室都配有的

問：我自己包被檢測，我實驗采用免疫夾心法檢測HBs Ag，因此需要兩個HBs Ag抗體，這兩個抗體分別要與HBs Ag抗原上的不同抗原決定簇作用，有符合條件的抗體出售嗎

答：有的，一個抗體包被，另一個抗體我們用HRP標(biāo)記好了，一抗是兔源，二抗羊源