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大鼠磷脂酰乙醇胺N甲基轉(zhuǎn)移酶(PEMT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)備及操作步驟

ELISA試劑盒檢測(cè)方法都可以通過標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀使用。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：ELISA試劑盒內(nèi)附標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育

8. 洗滌

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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技術(shù)問答：

提問:ELISA試劑盒每盒可測(cè)量多少標(biāo)本啊?

回答:每個(gè)96孔板里面標(biāo)準(zhǔn)曲線至少要用掉12-16個(gè)孔,剩下的孔如果每個(gè)標(biāo)本用兩個(gè)孔,大概能做40個(gè)標(biāo)本.分時(shí)間段的說法我沒聽懂.一個(gè)試劑如果一次沒有用完當(dāng)然可以繼續(xù)用多次.區(qū)別在于多次使用的時(shí)候每次都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,比合在一起做的話多費(fèi)一些料,所以確定重組蛋白和相應(yīng)的試劑夠用就好了.

提問:ELISA試劑盒中的抗體有哪些?

回答:ELISA的種類有多種,常用的是DAS-ELISA、NCM-ELISA、TDS-ELISA等. DAS-ELISA試劑盒中抗體有包被抗體和酶標(biāo)抗體,這兩種抗體是一種抗體,前者沒有酶標(biāo),后者用酶進(jìn)行了標(biāo)記. NCM-ELISA一般有一抗和二抗,這兩種抗體不一樣,前者（一抗）一般是鼠抗體或兔抗體,沒有酶標(biāo),相對(duì)應(yīng)的二抗一般是羊抗鼠或羊抗兔抗體,用酶進(jìn)行標(biāo)記.也有用馬大規(guī)模備抗體的.

提問:ELISA試劑盒中，組織樣本用什么勻漿液來進(jìn)行組織勻漿?

回答:PBS就可以吧。

提問:人或鼠的ELISA試劑盒可用于豬的檢測(cè)嗎?

回答:*詢問一下試劑盒提供廠家對(duì)于目標(biāo)檢測(cè)分子，不同種屬的交叉反應(yīng)效果。一般，人與豬，小鼠與豬之間的交叉反應(yīng)概率并不高

提問:如何降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)背景的方法?

回答:ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能獲得有意義的信息，ELISA試劑盒這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。ELISA試劑盒背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。