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當(dāng)前位置：上海仁捷生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）的含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）水平。用純化的小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA），再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠顆粒酶A（Gzms-A；GZMA）含量。
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：120、60、30、15、7.5、0 pg/mL.
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋
倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。
檢測(cè)范圍：
3.75 pg/mL - 120 pg/mL
靈敏度：
zui低檢測(cè)濃度小于0.1 pg/mL
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存： 2-8℃。
2．有效期： 6個(gè)月
基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分，由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effects）。這是免疫檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的大坑。
Jennifer Rufer事件就是一個(gè)典型的基質(zhì)效應(yīng)造成假陽(yáng)性的案例。該hCG試劑盒用的抗體是鼠源的，業(yè)界觀點(diǎn)認(rèn)為部分人群血液含有抗鼠抗體（HAMA），它們對(duì)鼠源的捕獲抗體和檢測(cè)抗體都有高親和力，會(huì)造成基質(zhì)效應(yīng)，導(dǎo)致了假陽(yáng)性。
如何評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，但不用擔(dān)心，有兩種簡(jiǎn)單的方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1. 線性稀釋?zhuān)?/span>
一般來(lái)講，抗原和捕獲/檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變：
基質(zhì)效應(yīng)與線性稀釋關(guān)系原理
前文提到，基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽(yáng)性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來(lái)。下圖是兩組實(shí)測(cè)的ELISA產(chǎn)品線性稀釋的對(duì)比結(jié)果，不同品牌的ELISA 試劑盒表現(xiàn)差距非常大：
兩種類(lèi)型的基質(zhì)效應(yīng)的線性稀釋結(jié)果比較（左圖為兩種BDCA-3試劑盒，右圖為兩種TFPI試劑盒）
圖中的縱坐標(biāo)代表的是回收率。定義用原液直接檢測(cè)的值為100%，不同稀釋比下的測(cè)量值先乘上稀釋比換算出濃度，再除以原液直接檢測(cè)的值，比值的百分?jǐn)?shù)，就是回收率。
左圖的黃色線，和右圖的紅色線，曲線平直，回收率穩(wěn)定在90-110%，很好地控制了基質(zhì)效應(yīng)的干擾。左圖的紫色線，回收率隨線性稀釋嚴(yán)重偏離100%，說(shuō)明存在顯著的基質(zhì)效應(yīng)；而回收率升高的趨勢(shì)，說(shuō)明稀釋前的真實(shí)濃度被壓低，對(duì)應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)是假陰性。右圖的綠色線也嚴(yán)重偏離100%，但回收率隨稀釋降低，于左圖紫色線正好相反，屬于明顯的假陽(yáng)性基質(zhì)效應(yīng)。
2. 摻入/回收率實(shí)驗(yàn)（Spike/Recovery Assay）
基質(zhì)效應(yīng)還可以通過(guò)分析物的摻入/回收率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)?；厥章式橛?0-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分，由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effects）。這是免疫檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的大坑。
Jennifer Rufer事件就是一個(gè)典型的基質(zhì)效應(yīng)造成假陽(yáng)性的案例。該hCG試劑盒用的抗體是鼠源的，業(yè)界觀點(diǎn)認(rèn)為部分人群血液含有抗鼠抗體（HAMA），它們對(duì)鼠源的捕獲抗體和檢測(cè)抗體都有高親和力，會(huì)造成基質(zhì)效應(yīng)，導(dǎo)致了假陽(yáng)性。
如何評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，但不用擔(dān)心，有兩種簡(jiǎn)單的方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1. 線性稀釋?zhuān)?/span>
一般來(lái)講，抗原和捕獲/檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變：
基質(zhì)效應(yīng)與線性稀釋關(guān)系原理
前文提到，基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽(yáng)性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來(lái)。下圖是兩組實(shí)測(cè)的ELISA產(chǎn)品線性稀釋的對(duì)比結(jié)果，不同品牌的ELISA 試劑盒表現(xiàn)差距非常大：
兩種類(lèi)型的基質(zhì)效應(yīng)的線性稀釋結(jié)果比較（左圖為兩種BDCA-3試劑盒，右圖為兩種TFPI試劑盒）
圖中的縱坐標(biāo)代表的是回收率。定義用原液直接檢測(cè)的值為100%，不同稀釋比下的測(cè)量值先乘上稀釋比換算出濃度，再除以原液直接檢測(cè)的值，比值的百分?jǐn)?shù)，就是回收率。
左圖的黃色線，和右圖的紅色線，曲線平直，回收率穩(wěn)定在90-110%，很好地控制了基質(zhì)效應(yīng)的干擾。左圖的紫色線，回收率隨線性稀釋嚴(yán)重偏離100%，說(shuō)明存在顯著的基質(zhì)效應(yīng)；而回收率升高的趨勢(shì)，說(shuō)明稀釋前的真實(shí)濃度被壓低，對(duì)應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)是假陰性。右圖的綠色線也嚴(yán)重偏離100%，但回收率隨稀釋降低，于左圖紫色線正好相反，屬于明顯的假陽(yáng)性基質(zhì)效應(yīng)。
2. 摻入/回收率實(shí)驗(yàn)（Spike/Recovery Assay）
基質(zhì)效應(yīng)還可以通過(guò)分析物的摻入/回收率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)?；厥章式橛?0-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分，由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effects）。這是免疫檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的大坑。
Jennifer Rufer事件就是一個(gè)典型的基質(zhì)效應(yīng)造成假陽(yáng)性的案例。該hCG試劑盒用的抗體是鼠源的，業(yè)界觀點(diǎn)認(rèn)為部分人群血液含有抗鼠抗體（HAMA），它們對(duì)鼠源的捕獲抗體和檢測(cè)抗體都有高親和力，會(huì)造成基質(zhì)效應(yīng)，導(dǎo)致了假陽(yáng)性。
如何評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，但不用擔(dān)心，有兩種簡(jiǎn)單的方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1. 線性稀釋?zhuān)?/span>
一般來(lái)講，抗原和捕獲/檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變：
基質(zhì)效應(yīng)與線性稀釋關(guān)系原理
前文提到，基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽(yáng)性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來(lái)。下圖是兩組實(shí)測(cè)的ELISA產(chǎn)品線性稀釋的對(duì)比結(jié)果，不同品牌的ELISA 試劑盒表現(xiàn)差距非常大：
兩種類(lèi)型的基質(zhì)效應(yīng)的線性稀釋結(jié)果比較（左圖為兩種BDCA-3試劑盒，右圖為兩種TFPI試劑盒）
圖中的縱坐標(biāo)代表的是回收率。定義用原液直接檢測(cè)的值為100%，不同稀釋比下的測(cè)量值先乘上稀釋比換算出濃度，再除以原液直接檢測(cè)的值，比值的百分?jǐn)?shù)，就是回收率。
左圖的黃色線，和右圖的紅色線，曲線平直，回收率穩(wěn)定在90-110%，很好地控制了基質(zhì)效應(yīng)的干擾。左圖的紫色線，回收率隨線性稀釋嚴(yán)重偏離100%，說(shuō)明存在顯著的基質(zhì)效應(yīng)；而回收率升高的趨勢(shì)，說(shuō)明稀釋前的真實(shí)濃度被壓低，對(duì)應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)是假陰性。右圖的綠色線也嚴(yán)重偏離100%，但回收率隨稀釋降低，于左圖紫色線正好相反，屬于明顯的假陽(yáng)性基質(zhì)效應(yīng)。
2. 摻入/回收率實(shí)驗(yàn)（Spike/Recovery Assay）
基質(zhì)效應(yīng)還可以通過(guò)分析物的摻入/回收率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)?；厥章式橛?0-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分，由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effects）。這是免疫檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的大坑。
Jennifer Rufer事件就是一個(gè)典型的基質(zhì)效應(yīng)造成假陽(yáng)性的案例。該hCG試劑盒用的抗體是鼠源的，業(yè)界觀點(diǎn)認(rèn)為部分人群血液含有抗鼠抗體（HAMA），它們對(duì)鼠源的捕獲抗體和檢測(cè)抗體都有高親和力，會(huì)造成基質(zhì)效應(yīng)，導(dǎo)致了假陽(yáng)性。
如何評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，但不用擔(dān)心，有兩種簡(jiǎn)單的方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1. 線性稀釋?zhuān)?/span>
一般來(lái)講，抗原和捕獲/檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變：
基質(zhì)效應(yīng)與線性稀釋關(guān)系原理
前文提到，基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽(yáng)性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來(lái)。下圖是兩組實(shí)測(cè)的ELISA產(chǎn)品線性稀釋的對(duì)比結(jié)果，不同品牌的ELISA 試劑盒表現(xiàn)差距非常大：
兩種類(lèi)型的基質(zhì)效應(yīng)的線性稀釋結(jié)果比較（左圖為兩種BDCA-3試劑盒，右圖為兩種TFPI試劑盒）
圖中的縱坐標(biāo)代表的是回收率。定義用原液直接檢測(cè)的值為100%，不同稀釋比下的測(cè)量值先乘上稀釋比換算出濃度，再除以原液直接檢測(cè)的值，比值的百分?jǐn)?shù)，就是回收率。
左圖的黃色線，和右圖的紅色線，曲線平直，回收率穩(wěn)定在90-110%，很好地控制了基質(zhì)效應(yīng)的干擾。左圖的紫色線，回收率隨線性稀釋嚴(yán)重偏離100%，說(shuō)明存在顯著的基質(zhì)效應(yīng)；而回收率升高的趨勢(shì)，說(shuō)明稀釋前的真實(shí)濃度被壓低，對(duì)應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)是假陰性。右圖的綠色線也嚴(yán)重偏離100%，但回收率隨稀釋降低，于左圖紫色線正好相反，屬于明顯的假陽(yáng)性基質(zhì)效應(yīng)。
2. 摻入/回收率實(shí)驗(yàn)（Spike/Recovery Assay）
基質(zhì)效應(yīng)還可以通過(guò)分析物的摻入/回收率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分，由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effects）。這是免疫檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的大坑。
Jennifer Rufer事件就是一個(gè)典型的基質(zhì)效應(yīng)造成假陽(yáng)性的案例。該hCG試劑盒用的抗體是鼠源的，業(yè)界觀點(diǎn)認(rèn)為部分人群血液含有抗鼠抗體（HAMA），它們對(duì)鼠源的捕獲抗體和檢測(cè)抗體都有高親和力，會(huì)造成基質(zhì)效應(yīng)，導(dǎo)致了假陽(yáng)性。
如何評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，但不用擔(dān)心，有兩種簡(jiǎn)單的方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1. 線性稀釋?zhuān)?/span>
一般來(lái)講，抗原和捕獲/檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變：
基質(zhì)效應(yīng)與線性稀釋關(guān)系原理
前文提到，基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽(yáng)性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來(lái)。下圖是兩組實(shí)測(cè)的ELISA產(chǎn)品線性稀釋的對(duì)比結(jié)果，不同品牌的ELISA 試劑盒表現(xiàn)差距非常大：
兩種類(lèi)型的基質(zhì)效應(yīng)的線性稀釋結(jié)果比較（左圖為兩種BDCA-3試劑盒，右圖為兩種TFPI試劑盒）
圖中的縱坐標(biāo)代表的是回收率。定義用原液直接檢測(cè)的值為100%，不同稀釋比下的測(cè)量值先乘上稀釋比換算出濃度，再除以原液直接檢測(cè)的值，比值的百分?jǐn)?shù)，就是回收率。
左圖的黃色線，和右圖的紅色線，曲線平直，回收率穩(wěn)定在90-110%，很好地控制了基質(zhì)效應(yīng)的干擾。左圖的紫色線，回收率隨線性稀釋嚴(yán)重偏離100%，說(shuō)明存在顯著的基質(zhì)效應(yīng)；而回收率升高的趨勢(shì)，說(shuō)明稀釋前的真實(shí)濃度被壓低，對(duì)應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)是假陰性。右圖的綠色線也嚴(yán)重偏離100%，但回收率隨稀釋降低，于左圖紫色線正好相反，屬于明顯的假陽(yáng)性基質(zhì)效應(yīng)。
2. 摻入/回收率實(shí)驗(yàn)（Spike/Recovery Assay）
基質(zhì)效應(yīng)還可以通過(guò)分析物的摻入/回收率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)?；厥章式橛?0-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
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