進(jìn)口檢測(cè)試劑盒用溴化乙錠等熒光染料示蹤的核酸電泳結(jié)果可用于判定核酸的純度。由于DNA分子較RNA分子大許多，電泳遷移率低;而RNA中以rRNAzui多，占到80%~85%，tRNA及核內(nèi)小分子RNA占15%~20%，mRNA占1%~5%。故總RNA電泳后可呈現(xiàn)特征性的三條帶。在原核生物為明顯可見(jiàn)的23S、16S的rRNA條帶及由5S的rRNA及由5S、5.8S的rRNA和tRNA構(gòu)成的條帶。mRNA因量少且分子大小不一，一般是看不見(jiàn)的。故可通過(guò)分析以溴化乙錠為示蹤染料的核酸凝膠電泳結(jié)果。

1. 甲醛變性的瓊脂糖(Agarose) 凝膠的配制

進(jìn)口檢測(cè)試劑盒在250 mL的錐形瓶中準(zhǔn)確稱量2 g Agarose (Sigama)，再加20 mL 10×TAE Buffer，144 mLDEPC處理過(guò)的雙蒸水，微波爐中化膠，待冷卻至50-60℃加EB至終濃度≤0.5 μg/mL。在通風(fēng)櫥中加入36 mL甲醛，放置一段時(shí)間以減少甲醛蒸汽。

2. RNA的甲醛變性電泳

(1) 樣品制備

RNA總量:10 μg

5×甲醛凝膠電泳緩沖液:4 μl

甲醛: 3.5 μl

甲酰胺:10 μl

加入無(wú)菌離心管中混合，95℃水浴變性2 min(或55℃，15 min)，取出后放入冰中冷卻。

(2) 加入2 μl無(wú)菌的DEPC處理的加樣運(yùn)載液。(使用加樣運(yùn)載液的目的有三: 增大樣品密度，以確保DNA均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi);使樣品呈現(xiàn)顏色，便于加樣操作;能明確顯現(xiàn)樣品在電泳膠上的泳動(dòng)位置。以 0.5 X TBE作電泳液時(shí)，溴*在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率與長(zhǎng) 300 bp 的雙鏈線狀DNA相同，而二甲苯氰FF 的泳動(dòng)速率與長(zhǎng)4 kb 的雙鏈線狀DNA相同。)

(3)進(jìn)口檢測(cè)試劑盒將膠板浸沒(méi)在1×甲醛凝膠電泳緩沖液中，點(diǎn)樣前5 V/cm預(yù)跑5 min。點(diǎn)樣后3-4 V/cm電泳。

(4)電泳結(jié)束后(溴*藍(lán)遷移到約8 cm處)，紫外燈下觀察， 照相。