國產elisa試劑盒的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學活性;
(2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;
(3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據已經使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,可概括四個方面: 1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。 2、研究抗酶抗體的合成。 3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應。 4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
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加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
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于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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國產elisa試劑盒其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
YM瓊脂 進口、國產 YM Agar 用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法) 250
YM11瓊脂 進口、國產 YM11 Agar 濾膜法用于霉菌、酵母菌的分離培養(yǎng)(NEOGEN方法) 250
OGY瓊脂 進口、國產 OGY Agar 用于霉菌和酵母菌分離培養(yǎng)和計數(Merck方法) 250
WL營養(yǎng)瓊脂 進口、國產 WL Nutrient Agar 用于啤酒和發(fā)酵產品中酵母菌和細菌的計數 250
改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基 進口、國產 Sabouraud’s Agar,Modified 用于真菌檢測 250
沙氏BHI瓊脂 進口、國產 Sabouraud BHI Agar 用于真菌檢測(Acumedia 方法) 250
菌種培養(yǎng)基 進口、國產 Strain Medium(for B.Cereus) 用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(SN標準) 250
四環(huán)素檢定瓊脂 進口、國產 Tetracyline Examination Agar 用于四環(huán)素殘留的微生物學檢定(SN標準) 250
葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 進口、國產 Glucose Tryptone Agar 用于嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數、平酸芽孢和厭氧芽孢)分離培養(yǎng)(SN標準) 250
布氏瓊脂 進口、國產 Brucella Agar 用于彎曲桿菌分離(SN標準) 250
國產elisa試劑盒
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