兔p物質(zhì)(SP) ELISA試劑盒正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢祥品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的雉確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng)
采用羊血清、兔血清或BSA等封閉
1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等◇其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當(dāng)前常用的是40孔
聚苯乙烯凹孔板●不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等里抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能
2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)-般要求門在9σ~96之間∝吸附溫度,時(shí)間及其蛋白里也
有一定影向,一般多采用
即用不同
司的蛋白質(zhì)濃度(01、10和10gm等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件
相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的D值。選擇OD值*而蛋白里少的衣度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10gm
3)繭標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELsA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取方陣法"(包被物、待檢樣品的
參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度·
)酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地旵色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如○PD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防
護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氨體,如TM和ABTs是當(dāng)前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)醱或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作