Quick Cell 外泌體提取試劑盒產(chǎn)品描述
外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡（20-200 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能，在特定細(xì)胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號分子；然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學(xué)通路目前尚不明晰。
外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液（腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。
本試劑盒處理單位樣品成本僅為國外同類產(chǎn)品的1/6-1/3，經(jīng)上海市計量測試技術(shù)研究院檢測，本試劑盒與國外產(chǎn)品提取純化相同樣品所得的外泌體，沒有顯著差異。
試劑盒組成
組分名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Exosomoe Concentration Solution | D3030L1411-1 | 100 mL |
Exosomoe Purification Filter | D3030L1411-2 | 20 tubes（2mL） |
*RNase/DNase Free, Sterile
Quick Cell 外泌體提取試劑盒運輸與保存條件
常溫運輸，室溫條件下質(zhì)保期24個月，使用前充分混勻。
使用方法
1.條件準(zhǔn)備
①高速離心機(可達10000g離心力)；2mL、50mL(或15mL)離心轉(zhuǎn)子；1.5mL，50mL(或15mL)離心管；② 1×PBS緩沖液。
2.樣品預(yù)處理
①樣品準(zhǔn)備：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于25℃水浴中進行解凍，將*融化后的樣品置于冰上；如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上；
②離心去除細(xì)胞碎片，將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，在4℃，3000 g條件下離心10 min，取上清轉(zhuǎn)移到新離心管中。
③離心去除其他雜質(zhì)，*次離心收集的上清液，在4℃，10000 g條件下離心20 min，取離心上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中備用。
注：本試劑盒盒可處理多種樣品，處理量因樣品種類不同而有差異。單次提取可處理的不同樣品量范圍見下表。
表1.單次提取可以處理的不同樣品量的范圍（單位：mL)
樣品名稱 | 細(xì)胞上清 | 血清 | 血漿 | 尿液 | 腦脊液 | 腹水 | 羊水 | 乳液 | 唾液 |
樣 品 量 | 1～20 | 0.5～10 | 0.5～10 | 1～20 | 1～20 | 1～20 | 1～20 | 1～20 | 0.5～10 |
3.提取外泌體
①上清液預(yù)處理：在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入Exosomoe Concentration Solution（ECS試劑）；部分粘稠的樣品（血清、血漿、乳液、唾液等）需先加入預(yù)冷的與樣品等體積的1×PBS進行稀釋，之后再加入ECS試劑，試劑用量如下表，表中樣品為舉例值，其他劑量樣品根據(jù)表中的試劑用量等比例調(diào)整。
表2.外泌體提取試劑用量表（單位：mL）
樣品名稱 | 細(xì)胞上清 | 血清 | 血漿 | 尿液 | 腦脊液 | 腹水 | 羊水 | 乳液 | 唾液 |
樣品劑量 | 20 | 10 | 10 | 20 | 20 | 20 | 20 | 10 | 10 |
1 x PBS | 20 | 10 | 10 | / | / | / | / | 10 | 10 |
ECS | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
②溶液混合：加入ECS試劑后將離心管蓋緊，上下顛倒離心管10-20次，再放置于2℃至8℃靜置過夜（10 h-12 h）；
③沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于4℃以10000 g離心60 min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒；（注：盡可能吸凈上清液）
④外泌體重懸：取400μL 1×PBS均勻吹打離心沉淀物，待其均勻懸浮在PBS中后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中；
⑤收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的1.5mL離心管于4℃以12000 g離心2 min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒。
4.純化外泌體
①純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入Exosomoe Purification Filter（EPF柱）上室中，于4℃以3000 g離心10 min，離心后收集EPF柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒；
②外泌體的保存：純化后的外泌體以50 -100μL進行分裝，分裝后的外泌體保存于-80℃低溫冰箱中，以備后繼實驗使用。
